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两种植物精油对扩展青霉菌体生长和产毒量的影响

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摘要

0 前言

0.1 果蔬采后病害防治和保鲜研究概况

0.1.1 化学杀菌方法

0.1.2 常用物理方法

0.1.3 生物防治

0.1.4 用于果蔬菜后病害防治的天然物质

0.2 精油对果蔬保鲜作用

0.2.1 植物精油简介

0.2.2 植物精油抗菌活性研究

0.2.3 植物精油对果蔬采后病害的防治效果

0.2.4 植物精油的抑菌机理研究

0.2.5 肉桂精油和丁香精油

0.3 青霉病害的发生和扩展青霉的控制

0.3.1 青霉病害

0.3.2 扩展青霉简介

0.4 展青霉素

0.4.1 来源及污染

0.4.2 理化性质

0.4.3 毒性及限量标准

0.4.4 生物合成途径

0.4.5 检测方法

0.5 基因表达量的分析方法

0.6 本课题研究的内容、目的及意义

0.6.1 主要研究内容

0.6.2 技术路线

0.6.3 研究目的及意义

1 肉桂精油对扩展青霉菌体生长和产毒量的影响

1.1 材料与仪器

1.1.1 实验原料及试剂

1.1.2 主要仪器及设备

1.2 方法与步骤

1.2.1 固体培养基中展青霉素的检测方法

1.2.2 扩展青霉孢子悬浮液的制作

1.2.3 含扩展青霉孢子悬浮液的菌饼制作

1.2.4 固体培养基中扩展青霉的菌落扩展实验

1.2.5 固体培养基中展青霉素的扩散实验

1.2.6 直接接触方式下肉桂粉对扩展青霉菌体生长的影响

1.2.7 熏蒸方式下肉桂精油的对扩展青霉的影响

1.2.8 数据分析

1.3 结果与讨论

1.3.1 展青霉素标准曲线的建立

1.3.2 固体培养基中扩展青霉的菌体扩展情况

1.3.3 固体培养基中展青霉素的分布情况

1.3.4 直接接触方式下肉桂粉对扩展青霉菌体生长的影响

1.3.5 肉桂精油对扩展青霉的MIC和MBC

1.3.6 熏蒸方式下肉桂精油对扩展青霉菌体生长和产毒量的影响

1.4 本章小结

2 丁香精油对扩展青霉菌体生长和产毒量的影响

2.1 材料与仪器

2.1.1 实验原料及试剂

2.1.2 主要仪器及设备

2.2 方法与步骤

2.2.1 液体培养基中展青霉素的检测方法

2.2.2 直接接触方式下丁香精油对扩展青霉菌体生长的影响分析

2.2.3 熏蒸方式下丁香精油对扩展青霉的影响

2.2.6 数据分析

2.3 结果与讨论

2.3.1 直接接触方式下丁香精油对扩展青霉菌体生长的影响

2.3.2 熏蒸方式下丁香精油对扩展青霉的影响

2.4 本章小结

3 肉桂精油和丁香精油抑菌成分分析

3.1 材料与仪器

3.1.1 实验原料及试剂

3.1.2 主要仪器及设备

3.2 方法与步骤

3.2.1 四种物质中挥发性成分的GC-MS分析

3.2.2 肉桂醛、丁香酚对扩展青霉的MIC和MBC测定

3.2.3 肉桂醛对扩展青霉菌体生长和产毒量的影响

3.2.4 丁香酚对扩展青霉菌体生长和产毒量的影响

3.2.5 数据分析

3.3 结果与讨论

3.3.1 四种物质中挥发性化学成分分析

3.3.2 肉桂醛、丁香酚对扩展青霉的MIC和MBC

3.3.3 熏蒸方式下肉桂醛对扩展青霉菌体生长和产毒量的影响

3.3.4 熏蒸方式下丁香酚对扩展青霉菌体生长和产毒量的影响

3.4 本章小结

4 四种物质对展青霉素合成相关基因的影响作用

4.1 材料与仪器

4.1.1 实验原料及试剂

4.1.2 主要仪器及设备

4.2 方法与步骤

4.2.1 四种物质对展青霉素分泌的影响测定

4.2.2 与毒素合成相关基因相对表达量的测定

4.3 结果与讨论

4.3.1 四种物质对展青霉素分泌量的影响

4.3.2 四种物质对展青霉素合成相关基因相对表达量的测定

4.4 本章小结

论文结论

参考文献

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发表论文

致谢

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摘要

扩展青霉(Penicillium expansum)是引起水果发生青霉病害的主要病原菌。其不仅导致水果的腐烂,侵染过程中分泌的展青霉素对人和动物存在致畸性、致癌性和免疫毒性。展青霉素可存在于多种水果及其制品中,其污染问题时有报道,已引起全社会的极大关注。目前,使用化学杀菌剂仍是控制果蔬产品采后病害的主要手段,但高剂量化学杀菌剂的使用可能造成环境污染、农药残留和抗药性增加等问题。因此,寻找安全环保的新型抗菌剂已成为国内外抗菌领域的研究热点。肉桂精油、丁香精油是两种植物精油,都是从天然植物中萃取所得的芳香物质,属于我国卫生部规定的药食同源物品,作为抑菌剂开发具有很广的应用前景。
  目前已有一些关于肉桂精油、丁香精油的抑菌活性的研究,但这两种植物精油对扩展青霉的抑菌活性,特别是对扩展青霉产毒的影响作用方面的研究鲜有报道。本论文同时研究了这两种精油对扩展青霉菌体生长和展青霉素分泌量两方面的影响,分析了其中的内在相关性,探究了两种精油及其主要成分对展青霉素合成相关基因的影响。主要内容如下:
  (1)熏蒸方式下固体培养中肉桂精油、肉桂醛、丁香精油、丁香酚对扩展青霉的最小抑菌浓度(MIC)分别为5.20μL/L、4.55μL/L、32.5μL/L、32.5μL/L,最低杀菌浓度(MBC)分别为5.20μL/L、4.55μL/L、39.0μL/L、39.0μL/L。
  (2)以熏蒸的方式,研究了在固体培养基上分别用不同浓度的肉桂精油、肉桂醛、丁香精油、丁香酚处理对扩展青霉的生长和产毒的影响以及这种影响随时间的变化趋势。各处理组对扩展青霉的生长都有抑制作用,浓度越高,抑制作用越强,随着时间的推移逐步减弱。随着抑菌剂的浓度升高,各处理组对展青霉素分泌量的抑制作用越明显。4.55μL/L肉桂精油、3.90μL/L肉桂醛、26.0μL/L丁香精油、26.0μL/L丁香酚在各处理组中抑制效果最佳。肉桂精油、肉桂醛对扩展青霉菌体生长和产毒量的抑制作用优于丁香精油、丁香酚组。
  (3)直接接触方式下,丁香精油在固体和液体培养基中均表现出对扩展青霉菌体生长的明显抑制作用。熏蒸方式下,26.0μL/L丁香精油对孢子萌发抑制效果最好。该浓度的丁香精油处理组在液体培养基中抑制了菌体生长,但同时促进了毒素分泌。上述浓度熏蒸,对苹果青霉病斑扩展有一定抑制作用,但同时也促进了毒素分泌。
  (4)通过GC-MS分析了肉桂精油、丁香精油的挥发性气体成分。肉桂精油挥发性气体中肉桂醛为主要成分,占45.31%;丁香精油挥发性气体中丁香酚为主要成分,占46.66%。通过对肉桂醛、丁香酚的固体培养抑菌实验发现,肉桂醛、丁香酚对扩展青霉生长和产毒的抑制作用均分别强于肉桂精油、丁香精油。说明肉桂醛、丁香酚分别是肉桂精油、丁香精油的挥发性气体中起主要抑菌作用的物质,并且这两种物质不仅能够抑制扩展青霉菌体生长,还能同时降低展青霉素分泌量。
  (5)测定了丁香精油、丁香酚、肉桂精油和肉桂醛对展青霉素合成相关基因表达量的影响,发现处理组中扩展青霉产毒量降低,对应的PatK、Pat、PatN的相对表达量也降低,并与毒素浓度降低程度具有相关性。处理组对PatL的相对表达量作用不明显,对PatC的相对表达量有明显的促进作用。

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