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两种海参极性脂质对Aβ致老年性痴呆的保护作用研究

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摘要

前言

1 阿尔兹海默病

1.1 概述

1.2 发病机制

1.3 老年性痴呆治疗药物的研究进展

1.4 老年性痴呆的模型研究进展

2 海参概述

2.1 海参活性成分研究进展

2.2 海参极性脂质研究现状

3 立题依据及研究的目的和意义

第一章 两种海参极性脂质对Aβ致老年性痴呆细胞模型的保护作用

第一节 海参脑苷脂对Aβ致PC12细胞损伤的保护作用

1.实验材料及方法

2 实验结果

第二节 海参磷脂对APP/PS1双转细胞Aβ分泌量的影响

1.实验材料及方法

2 实验结果

本章讨论

本章小结

第二章 两种海参极性脂质对PC12细胞突触重塑的影响

1.实验材料及方法

1.1 材料与仪器

1.2 实验方法

2 实验结果

2.1 SCC和SCP对PC12细胞突触伸长的影响

2.2 SCC和SCP对PC12细胞内突触素含量的影响

2.3 免疫荧光检测SCC和SCP对PC12细胞内突触素和GAP-43的影响

本章讨论

本章小结

第三章 海参脑苷脂对SAMP8小鼠认知障碍的改善作用

第一节 海参脑苷脂对SAMP8小鼠学习记忆能力的影响

1.实验材料及方法

2.实验结果

第二节 海参脑苷脂对SAMP8小鼠行为学改善效果的机制研究

1.材料和方法

2.实验结果

本章讨论

本章小结

参考文献

结论

本论文的特色及创新之处

致谢

个人简历

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摘要

阿尔兹海默病(Alzheimer's Disease,AD),又称老年性痴呆,是一种以脑内神经元损伤及认知功能障碍为主要表现的神经退行性疾病,其病理学特征包括神经纤维缠结及脑内淀粉样沉淀的形成。Aβ是脑内淀粉样沉淀的重要组成成分,近年来诸多研究表明其在老年性痴呆的发病过程中发挥着重要的作用。作为药食两用的传统海珍品,海参具有多种活性成分,如海参皂苷、海参多糖、海参脂质等。有研究表明海参磷脂具有抗氧化能力,可改善因痴呆造成的学习和认知能力障碍,但有关海参极性脂质在Aβ沉积方面的作用仍鲜见报道。本文首先建立两种AD体外模型评价海参极性脂质在Aβ损伤方面的保护作用及对突触生长的促进作用,在此基础上利用动物模型进一步评价了海参脑苷脂在改善学习和认知能力方面的作用,并探讨了其作用机制。主要研究结果如下:
  本文采用Aβ25-35损伤PC12细胞及APP/PS1双转细胞,分别建立了两种不同的AD模型,并依此探究了海参脑苷脂和海参磷脂的神经保护作用。实验结果发现,Aβ25-35可明显降低PC12细胞的存活率,损伤细胞形态;海参脑苷脂预处理后可增加PC12细胞的存活率,抑制LDH漏出,保护细胞膜的完整性,降低促凋亡基因Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达并使GSK-3β的表达量恢复正常,表明海参脑苷脂抗Aβ25-35损伤作用可能依赖于其抗凋亡活性。在APP/PS1双转细胞体系中,海参磷脂可抑制其细胞外Aβ1-40和Aβ1-42的分泌量,高剂量时可降低细胞内APP的蛋白表达量,具有一定的神经保护的作用。
  与此同时,本文通过在低营养环境下孵育PC12细胞,探究海参极性脂质在促突触重塑方面的作用。实验结果表明,海参极性脂质可促进PC12细胞突触重塑,其作用机制可能依赖于刺激突触素和GAP-43的表达,使其维持在正常水平,从而抑制营养缺乏导致的细胞损伤。
  在体外实验的基础上,本文选取海参脑苷脂为研究对象,利用快速老化小鼠SAMP8小鼠为动物模型,通过多种行为学测定方法,进一步研究海参脑苷脂对老年性痴呆的影响。实验结果显示,SAMP8小鼠表现出明显的学习和认知能力障碍,而海参脑苷脂饮食干预后,Barnes迷宫实验中小鼠找到目标箱的潜伏期和错误次数明显降低,Morris水迷宫实验中小鼠找到隐藏平台的潜伏期缩短、穿越平台次数增加、目标象限停留时间明显延长,表明海参脑苷脂可以提高小鼠的学习和记忆能力,改善认知障碍。
  结合动物实验和细胞实验的结果,本文通过对SAMP8小鼠海马区内Aβ和GAP-43含量及脑组织、肝脏组织和血清中相关氧化应激指标的测定,探究海参脑苷脂改善学习和记忆能力的作用机制。实验结果表明,SAMP8小鼠海马组织内Aβ含量明显增多,GAP-43含量显著下降,脑内出现严重的氧化应激现象,但海参脑苷脂可明显改善小鼠海马组织内Aβ沉积现象、降低NO、MDA、8-OHdG及8-oxo-G的含量并升高SOD活力,表明海参脑苷脂可通过降低SAMP8小鼠海马组织内Aβ含量,提高脑内抗氧化物酶活力,抑制NO毒性,降低脑内脂质、DNA和RNA的过氧化现象,提高小鼠的学习和记忆能力。
  本文首次发现海参脑苷脂及海参磷脂均可在Aβ致老年性痴呆模型中发挥神经保护作用,海参脑苷脂可改善老年性痴呆模型小鼠的学习和记忆能力,并通过体内外实验初步探明其作用机制。本文为海参极性脂质在预防老年性痴呆方面的作用提供了科学依据,为相关功能性食品的开发奠定了理论基础。

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