栉孔扇贝、海湾扇贝热休克蛋白22基因的克隆和表达及其与栉孔扇贝抗热性状相关SNP位点的筛查

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第一章前言

第一节我国扇贝养殖现状及大规模死亡的原因

1.我国扇贝养殖现状

2.影响扇贝大规模死亡的因素

第二节热休克蛋白22

1.热休克蛋白的发现及分类

2.HSP22的结构特征和组织分布

3.HSP22基因结构和表达调控

4.HSP22的生物学功能

5.HSP22的研究现状

第三节单核苷酸多态性

1.单核苷酸多态性的概念

2.单核苷酸多态性的检测方法

3.单核苷酸多态性的应用

第四节本研究的目的和意义

1.本研究的目的

2.本研究的意义

第二章材料与方法

第一节材料

1.主要化学试剂与仪器设备

2.试剂和培养基的配置

第二节方法

1.应激实验样品及样品处理

2.扇贝基因组DNA提取

3.扇贝总RNA提取

4.cDNA文库的构建及序列分析

5.全长cDNA序列的获得

6.琼脂糖凝胶纯化PCR产物

7.感受态细胞的制备、连接及转化

8.目的基因的生物信息学分析

9.荧光实时定量PCR(Florescent real-time quantitative PCR)检测目的基因的表达

第三章结果与讨论

第一节海湾扇贝热休克蛋白22基因的克隆与表达分析

1.海湾扇贝热休克蛋白22基因cDNA全长的克隆

2.海湾扇贝热休克蛋白22基因的序列分析

3.海湾扇贝热休克蛋白22基因的同源性分析

4.海湾扇贝热休克蛋白22基因的进化分析

5.海湾扇贝热休克蛋白22基因在扇贝组织中的分布

6.海湾扇贝热休克蛋白22基因在重金属刺激下的表达规律研究

第二节栉孔扇贝热休克蛋白22基因的克隆与表达分析

1.栉孔扇贝热休克蛋白22基因cDNA全长的克隆

2.栉孔扇贝热休克蛋白22基因的序列分析

3.栉孔扇贝热休克蛋白22基因的同源性分析

4.栉孔扇贝热休克蛋白22的进化分析

5.栉孔扇贝热休克蛋白22基因在扇贝组织中的分布

6.栉孔扇贝热休克蛋白22基因在鳗弧菌刺激下的表达规律研究

第三节栉孔扇贝HSP22基因的多态性分析

1.栉孔扇贝HSP22基因潜在SNP位点的电子筛查

2.栉孔扇贝HSP22基因有潜在SNP位点的序列的克隆

3.序列比较与多态性分析

第四节栉孔扇贝热休克蛋白22基因的SNP位点+94 C/A与扇贝抗热性的关系

1.热敏感群体和抗热群体的划分及取样

2.采用Bi-PASA PCR技术对热休克蛋白22基因+94位点多态性进行检测

3.CfHSP22基因+94位点多态性与扇贝抗热性状的关系分析

4.+94位点不同基因型扇贝的死亡率比较

第五节讨论

1.海湾扇贝HSP22基因的克隆及其在重金属刺激下的表达研究

2.栉孔扇贝HSP22基因的克隆及其在鳗弧菌刺激下的表达研究

3.栉孔扇贝HSP22基因与抗热性状相关的SNP位点的筛查与验证

第四章结论

参考文献

个人简历及发表的学术论文

致谢