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MicroRNA-195对人胶质瘤细胞株体外侵袭迁移能力的影响

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摘要

符号说明

前言

材料与方法

1．材料

2 方法

结果

1．加入氯仿后细胞裂解物分为三组

2．微量紫外/可见分光光度仪测定RNA浓度

3．miR-195实施荧光定量PCR

4．荧光显微镜观察转染效率

5．Transwell小室实验

6．细胞划痕试验

讨论

结论

参考文献

综述

个人简介

致谢

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摘要

目的:研究微小RNA-195对人脑胶质瘤细胞系SHG-44及U251在侵袭、迁移方面的作用并探讨可能的作用机制。
　　 方法:使用寡核苷酸miR-195 mimics转染人脑胶质瘤细胞株SHG-44、U251，并通过Real-time PCR检测miR-195的表达，然后通过伤痕愈合实验检测细胞迁移能力，划痕0h和48h分别拍照，使用Image J图像处理软件计算迁移面积;Transwell小室法检测转染组和对照组胶质瘤细胞株迁移和侵袭能力。统计学数据处理采用SPSS13.0软件处理，单因素方差分析进行统计学分析，按照P＜0.05作为检验水准。
　　 结果:荧光显微镜下观察转染效率90％以上，实施荧光定量PCR溶解曲线示miR-195以及内参U6的溶解曲线均为单峰，可见引物特异性好，产物单一;扩增曲线示可明显看到典型的PCR扩增曲线的对数扩增前期、对数扩增期及平台期，说明有足够的PCR产物，可见引物有较高的敏感度;PCR结果显示以未处理的细胞系为空白对照，miR-195转染组的miR-195表达水平明显上调，可到达对照组的6～7倍;细胞划痕实验示48小时后空白组与控制组有大量细胞已经移动到划痕中央，而转染miR-195组移动细胞数明显少于前两组;在U251细胞系Transwell小室实验中空白组控制组与miR-195转染组迁移的细胞数分别是(416.9±28.7)(469.2±27.6)(221.3±28.3);在SHG-44细胞系Transwell小室实验中空白组对照组与miR-195转染组迁移的细胞数分别是(264.4±26.9)(251.9±25.9)(397.2±37.9)，差别有统计学意义。结论:体外研究表明:miR-195具有遏制恶性胶质瘤U251细胞的侵袭迁移作用，在其侵袭性生长发面起重要抑制作用，是恶性胶质瘤基因治疗中的一个前景光明的候选靶点;但在WHO分型低度恶性的SHG-44细胞中起促进细胞侵袭生长的作用，因此具体的作用机制还需进一步深化的研究。

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