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蒽醌类活性成分群的中空纤维细胞捕获及超声乳化离子液体微萃取分析

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中文摘要

第一部分

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英文摘要

1 引言

2 材料

2.1 仪器与装置

2.2 对照品、试剂及药材

2.3 材料和试剂

2.4 对照品溶液和供试品溶液的制备

2.5 色谱条件

2.6 细胞培养与种植

2.7 HFCF-HPLC操作过程

2.8 活性成分的细胞捕获因子

3 结果与讨论

3.1 种植有细胞和培养液的MOF-1b中空纤维的表面特性

3.2 筛选前后细胞的存活率

3.3 实验条件的选择

3.4 MOF-1b中空纤维内活性中心与活性成分的非特异结合

3.5 蒽醌类化合物的鉴别和中药萃取液中的蒽醌类化合物的色谱分析

3.6 方法的重现性

3.7 方法的稳定性

3.8 HFCF-HPLC法的应用

4 结论

参考文献

第二部分

中文摘要

英文摘要

1 引言

2 仪器与试剂

2.1 仪器

2.2 对照品、试剂及药材

2.3 对照品溶液的制备

2.4 供试品溶液的制备

2.5 色谱条件

2.6 实验步骤

3 结果

3.1 平均富集倍数

3.2 实验条件的优化

3.3 方法学的考察

3.4 样品的应用

4 讨论

4.1 本法与其它报道方法的比较

4.2 UEILME萃取机理

5 结论

参考文献

综 述

作者简历

致谢

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摘要

本研究首次将结直肠癌细胞HCT116种植于中空纤维内壁,并用长满细胞的中空纤维作为活性筛选的工具,将其插入到中药提取液中对中药活性成分进行筛选和捕获。筛选结束后,用甲醇解吸与细胞结合的活性成分并进行HPLC分析。提出一种研究和筛选生物活性成分的新方法——中空纤维细胞捕获-高效液相色谱法(Hollowfibercellfishingcoupledwithhighperformanceliquidchromatography,HFCF-HPLC)。该方法已经成功用于中药材中蒽醌类活性成分的筛选和捕获。本实验分析和考察了种植有HCT116细胞的中空纤维的表面特性,筛选前后细胞的存活率,中空纤维HCT116细胞捕获-HPLC法的重现性和稳定性等。在此基础上首次提出并定义了HFCF-HPLC法筛选活性成分的细胞捕获因子。从中药材中筛选出的蒽醌类活性成分的结构通过与已质谱鉴定的对照品的保留时间比较来确定。同时,通过阳性对照品——吲哚美辛对中空纤维HCT116细胞捕获法进行证实。结果表明,HFCF-HPLC是一种简便、快速、有效和可靠的方法,可以筛选和分析中药材中的活性成分。同时,它也具有筛选中药中其他活性成分的潜力。
  本文建立了一种超灵敏的超声乳化离子液体微萃取(Ultrasoundemulsificationionicliquidmicroextraction,UEILME)结合高效液相色谱法(Highperformanceliquidchromatography,HPLC)同时富集与分析传统中药材中五种蒽醌类化合物及日化品中蒽醌类添加剂。考察实验条件,如:萃取剂种类与量,样品溶液的pH,超声温度与时间,离心转速和离心时间等。当在pH为2的样品溶液中,加入60mg1-己基-3-甲基-6氟咪唑磷酸盐(萃取剂),在40℃超声7min,之后在2500rpm离心6min,可获得最佳的实验结果。在最优实验条件下,5种化合物均获得了较好的线性,RSD均大于0.99;检测线和定量限分别为10-90mg/mL和50-250mg/mL;相对标准偏差小于9.8%;富集倍数在80-197倍之间。与传统的分散液液微萃取法比较,该方法具有更低的检测限和定量限。实验结果证明UEILME-HPLC是一种简单、有效、快速、灵敏和对环境友好的方法,可用于蒽醌类化合物的萃取、富集和分析。

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