大麻素WIN55、212-2对体外培养牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的影响

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目的：
　　研究大麻素WIN55，212-2对体外培养的牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-I表达的影响，从而探讨其降眼压的机制。
　　方法：
　　 1.牛眼小梁细胞的培养和鉴定：采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代及传代培养，对第三代细胞应用免疫组化方法（波形蛋白，NSE，Ⅷ因子相关抗原染色）进行鉴定，应用透射电镜对细胞进行形态学及生长特性的观察，确定所获细胞大多数为小梁细胞组织来源；
　　 2.免疫组化SP染色测定MMP-3，MMP-9的量：取传3代的小梁细胞经消化离心后以5×104个/mL的密度接种于预置盖玻片的6孔板中，待细胞接近融合，更换无血清培养液培养，饥饿48h后将培养孔随机分为6组。1～5组施加含大麻素WIN55，212-2终浓度为0（对照组）、1、10、20、40μmol/L的无血清培养液，第6组为阴性对照组(一抗为PBS)。48h后取出盖玻片进行MMP-3及MMP-9免疫细胞化学实验。每种浓度重复4次。结果进行计算机图像分析并进行统计学检验。
　　 3.提取上清液用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化：取传3代小梁细胞，经消化离心后按5×104个/mL的密度接种于96孔板中，待细胞接近融合后，用无血清培养液培养饥饿48h，使细胞状态尽量达到同步化。将细胞随机分为5组，每组10个复孔，分别施加含大麻素WIN55，212-2终浓度为0（对照组）、1、10、20、40μmol/L的无血清培养液。培养48h后吸出对应孔中的细胞上清液分装于EP管中，应用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化情况。
　　结果：
　　体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP-3及MMP-9；含大麻素WIN55，212-2终浓度为1、10、20、40μmol/L的无血清培养液随浓度的提高可促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达，并抑制TIMP-1的表达。
　　结论：
　　一定剂量的大麻素可以促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达(P＜0.05)，并抑制TIMP-1的表达(P＜0.01)，从而达到降低眼压的目的。

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作者
赵越超;
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作者单位

山西医科大学;

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授予单位山西医科大学;
学科眼科学
授予学位硕士
导师姓名王万辉;
年度 2012
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类眼压与青光眼;中药实验药理;
关键词
大麻素WIN55; 大麻素212-2; 牛眼小梁细胞; 基质金属蛋白酶; 组织抑制因子; 原发性开角型青光眼; 体外培养技术; 降压机制;

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