犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒三联灭活疫苗的研制

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本文通过对犬细小病毒青岛地区流行株的分离鉴定、犬副流感病毒青岛地区流行株分离鉴定以及犬瘟热病毒培养方式的优化，建立三种病毒种子批，从病毒培养、抗原浓缩、抗原灭活及抗原乳化等方面优化三联灭活疫苗的生产工艺，成功研制出犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬副流感病毒三联灭活疫苗。为了解犬细小病毒致病机理，本试验剖检来自青岛地区犬细小自然发病死亡犬，通过临床剖检、组织病理学观察、Real-time PCR对犬细小病毒进行组织嗜性分析，探讨犬细小病毒的感染途径。本试验成功分离到一株青岛本地区犬细小流行毒株，采用PCR、理化特性检验、HA及HI等方法对其进行了鉴定，并对其VP2编码区基因序列进行了分析。该毒株在F81细胞盲传至第2代开始出现典型细胞病变，可凝集猪红细胞，血凝效价为29，可被犬细小阳性血清特异性中和产生血凝抑制现象，该毒株效价为106.0TCID50/ml，与CPV-2a核苷酸编码区相似性达99.6％。
　　本研究通过剖检临床搜集的犬副流感病毒阳性病料并进行犬副流感病毒分离，成功分离到一株犬副流感病毒，采用RT-PCR、HA及HI等方法对其进行了鉴定。结果显示：该株病毒可凝集鸡红细胞，血凝效价为28，均可被犬副流感病毒阳性血清特异性中和产生血凝抑制现象。以CPV分离株第15代细胞培养毒株、CPIV-QD121004分离株第15代细胞培养毒株和本实验室保存的CDV-BJ株作为三联灭活疫苗研究用种毒，从病毒培养、抗原浓缩、抗原灭活及抗原乳化以及佐剂选择等方面优化三联灭活疫苗的生产工艺。结果表明：CPV分离毒株以5%的比例同步接种F81细胞， CDV-BJ株以5%吸附接种Vero细胞，CPIV分离株以3%比例同步接种Vero细胞，培养96h能获得较高滴度的病毒含量。三种抗原按1：1：1比例加入0.3%的比例甲醛溶液灭活24h，使用Pet佐剂、Carbomer、MONTANIDETM PET GEL A新型聚合物水性佐剂佐剂三种佐剂均以20％比例500rpm下低速剪切10min进行乳化制成三种不同佐剂的三联灭活疫苗。将研制成的三种不同佐剂三联灭活疫苗以1.0ml/头份剂量皮下免疫SPF比格犬，首免三周后进行一次加强免疫，同时以同等剂量英特威四联活疫苗免疫日龄相同的比格犬为阳性对照，首免后每隔一周采血一次，采用间接ELISA抗体检测、HA/HI测定血清中抗体水平。结果表明：二免加强一周后抗体开始上升，二周后抗体滴度达到较高水平，与免疫英特威四联活疫苗免疫比格犬抗体水平差异不显著，说明三种不同佐剂的三联灭活苗均能产生高滴度水平的抗体。

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作者
杨宗统;
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作者单位

青岛农业大学;

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授予单位青岛农业大学;
学科基础兽医学
授予学位硕士
导师姓名尹燕博;
年度 2017
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类犬;家畜免疫学;
关键词
家犬养殖; 犬瘟热病毒; 家畜免疫; 灭活疫苗;

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