委内瑞拉马脑脊髓炎病毒核酸与抗体快速检测技术研究

声明

摘要

文献综述

1．委内瑞拉马脑炎病原学研究进展

1．1 VEEV形态及理化特征

1．2 VEEV的繁殖特性及变异性

1．3 VEEV基因组结构

1．4 VEEV的蛋白结构与功能

2．委内瑞拉马脑炎流行病学

3．委内瑞拉马脑炎病毒诊断技术

3．1 病毒的分离与鉴定

3．2 血清学诊断技术

3．3 分子生物学诊断方法

4．实时荧光定量PCR技术

4．1 反应原理

4．2 荧光定量PCR技术的分类

4．3 荧光定量PCR技术的特点

5．本课题研究的目的及意义

试验一 委内瑞拉马脑炎病毒E2蛋白的原核表达

1 材料及方法

1．1 试验材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 目的基因的PCR产物

2．2 重组表达载体的构建和鉴定

2．3 SDS-PAGE分析

2．4 重组蛋白的纯化

2．5 Western-Blot检测纯化蛋白活性

3．讨论

3．1 E2蛋白作为诊断抗原的依据

3．2 pET32a(+)表达的优点

3．3 目的蛋白纯化

4．小结

试验二 委内瑞拉马脑炎病毒间接ELISA检测方法的建立

1．材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2．结果与分析

2．1 重组蛋白抗原最适包被浓度与血清稀释度的确定

2．2 重组蛋白最适包被条件的确定

2．3 封闭液的确定

2．4 间接ELISA方法应用程序的确定

2．5 灵敏度试验

2．6 特异性试验

2．7 建立的方法对临床样品的检测结果

3．讨论

4．小结

试验三 委内瑞拉马脑炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立

1．材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2．结果与分析

2．1 反应条件的优化结果

2．2 荧光定量RT-PCR反应参数的优化

2．3 灵敏度试验

2．4 标准曲线的建立

2．5 特异性试验

2．6 重复性试验

2．7 建立方法对临床样品的检测结果

3．讨论

4．小结

全文总结

参考文献

缩略词表

致谢

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