小立碗藓对铜胁迫的生理响应及其PpCTR1基因敲除和过表达载体构建

声明

摘要

第一章 文献综述

1 模式植物小立碗藓

1．1 小立碗藓简介

1．2 小立碗藓的培养

2 小立碗藓的遗传转化

2．1 常用的植物遗传转化方法

2．2 苔藓植物的遗传转化方法

2．3 小立碗藓的基因打靶

3 铜对植物的生理特性的影响

3．1 铜在植物体中的作用

3．2 铜胁迫对苔藓植物生理特性的影响

4 CTR1基因

5 本课题的目的和意义

第二章 小立碗藓对铜胁迫的一些生理响应

1 实验材料与用品

1．1 实验材料

1．2 主要试剂及溶液

1．3 实验器材

2 实验方法

2．1 铜胁迫对小立碗藓细胞活力的影响

2．2 丙二醛(MDA)含量的测定

2．3 植物保护酶活性的测定

2．4 可溶性蛋白含量的测定

3 结果与分析

3．1 铜胁迫对小立碗藓细胞活力的影响

3．2 铜胁迫对小立碗藓丙二醛(MDA)含量的影响

3．3 铜胁迫对小立碗藓保护酶活性的影响

3．4 铜胁迫对可溶性蛋白含量的影响

4 讨论

第三章 小立碗藓PpCTR1基因敲除载体的构建

1 实验材料与用品

1．1 实验材料

1．2 菌株及质粒载体

1．3 主要试剂及溶液

1．4 培养基

1．5 实验器材

2 实验方法

2．1 小立碗藓基因组DNA的提取

2．2 目的基因的PCR扩增

2．3 利用限制性内切酶酶切及连接构建pTN182-PpCTR1基因敲除载体

3 结果与分析

3．1 小立碗藓基因组DNA质量检

3．2 小立碗藓PpCTR1up、PpCTR1down的克隆

3．3 利用限制性内切酶酶切及连接构建pTN182-PpCTR1基因敲除载体

第四章 小立碗藓PpCTR1基因过表达载体的构建

1 实验材料与用品

1．1 实验材料

1．2 菌株及质粒载体

1．3 主要试剂及溶液

1．4 培养基

1．5 实验器材

2 实验方法

2．1 制备cDNA

2．2 目的基因的PCR扩增

2．3 利用限制性内切酶酶切及连接构建pTFH15．3-PpCTR1过表达载体

3 结果与分析

3．1 总RNA质量检测

3．2 小立碗藓PpCTR1的克隆

3．3 利用限制性内切酶酶切及连接构建pTFH15．3-PpCTR1过表达载体

第五章 小立碗藓的培养

1 实验材料与用品

1．1 实验材料

1．2 培养基

1．3 实验器材

2 实验方法

2．1 小立碗藓茎叶体的培养

2．2 小立碗藓原丝体的培养

3 实验结果及分析

3．1 小立碗藓茎叶体的培养

3．2 小立碗藓原丝体的培养

3．3 蔗糖对原丝体生长的影响

3．4 接种的配子体碎片的破碎程度对原丝体生长的影响

4 讨论

第六章 PEG介导的小立碗藓的原生质体的转化

1 实验材料与用品

1．1 实验材料

1．2 主要试剂及溶液

1．3 培养基

1．4 实验器材

1．5 用品

2 实验方法

2．1 DNA的准备

2．2 原生质体的准备

2．3 转化过程

3 结果与分析

3．1．原生质体的分离

3．2 原生质体的转化与再生

3．3 转化后植株的筛选

4 讨论

结论

参考文献

致谢