赤霉素调控苹果节间伸长的生理及分子生物学机制研究

声明

摘要

前言

1 赤霉素的发现及研究现状

1．1 赤霉素的发现及分类

1．2 赤霉素的生物合成部位

2 赤霉素的生理作用

3 赤霉素促进植物伸长的作用机理

3．1 赤霉素促进细胞分裂

3．2 赤霉素促进细胞伸长

4 赤霉素与其他激素间的相互作用

5 赤霉素的生物合成途径和关键酶类

5．1 古巴焦磷酸合酶

5．2 内根-贝壳杉烯合成酶

5．3 GA-20氧化酶

5．4 GA-3β羟化酶

6 赤霉素合成、传导途径突变导致的矮化研究

7 果树赤霉素合成相关基因的研究现状

第一章 外源GA3处理对苹果组培苗的生理影响

1 试验材料

2 试验方法

2．1 酶活性的测定

2．2 内源激素含量的测定

3 结果与分析

3．1 不同浓度GA3处理对柱型和普通型苹果组培苗的影响

3．2 外源GA3处理对柱型和普通型苹果组培苗三种酶活性的影响

3．3 外源GA3处理对柱型和普通型苹果组培苗内源激素含量的影响

4 讨论

第二章 苹果内根-贝壳杉烯氧化酶基因(MdKS)的克隆及序列分析

1 试验材料

1．1 试验植物

1．2 质粒和菌株

1．3 主要工具酶及试剂

1．4 试验仪器

1．5 所用溶液及其配制

1．6 生物信息学分析试验序列

2 试验方法

2．1 苹果组织总RNA的提取

2．2 总RNA中DNA的消化

2．3 cDNA第一链的合成

2．4 基因ORF区的扩增

2．5 扩增产物的回收、克隆与测序

2．6 苹果MdKS基因的生物信息学分析

3 果与分析

3．1 苹果各组织总RNA提取纯度检测

3．2 苹果MdKS基因全长cDNA序列的扩增

3．3 柱型苹果MdKS的cDNA序列及推导的氨基酸序列

3．4 柱型和普通型苹果MdKS基因及其蛋白序列分析

3．5 MdKS推导的氨基酸序列的同源性及系统进化分析

3．6 MdKS的功能位点及与底物结合位点分析

3．7 MdKS蛋白的亚细胞定位预测、跨膜预测及信号肽预测

4 讨论

第三章 苹果古巴焦磷酸合酶基因(MdCPS)片段的克隆及序列分析

1 试验材料

1．1 试验植物

1．2 质粒和菌株

1．3 主要工具酶及试剂

1．4 试验仪器

1．5 所用溶液及其配制

2 试验方法

2．1 苹果古巴焦磷酸合酶(CPS)基因片段的克隆

2．2 苹果古巴焦磷酸合酶(CPS)基因的序列分析

3 结果与分析

3．1 柱型苹果CPS基因cDNA片段的获得

3．2 柱型苹果MdCPS的cDNA序列及推导的氨基酸序列

3．3 MdCPS推导的氨基酸序列的同源性及系统进化分析

3．4 MdCPS的功能位点及与底物结合位点分析

3．5 MdCPS蛋白的亚细胞定位预测、跨膜预测及信号肽预测

4 讨论

第四章 利用Real-time PCR进行表达分析

1 试验材料

1．1 试验植物

1．2 主要工具酶及试剂

1．3 试验仪器

2 试验方法

2．1 总RNA的提取，总RNA中DNA的消化，cDNA第一链的合成

2．2 实时Realtime-PCR对不同组织的表达分析

2．3 Real-time PCR的反应体系

2．4 Real-time PCR的反应程序

3 结果与分析

3．1 样品RNA的提取

3．2 目的基因的扩增曲线、溶解曲线

3．3 MdKS基因的RT-PCR结果

3．4 MdCPS基因的RT-PCR结果

4 讨论

参考文献

英文缩略词

导师组意见

致谢