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肝癌生物标本库的建立及应用

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文献回顾

一、 肝癌的研究现状

二、肿瘤生物标本库

实验内容

第一部分 肝癌生物标本的规范化收集

一、材料

二、方法

三、结果

第二部分 肝癌标本临床资料的收集与信息化管理

一、材料

二、方法

三、结果

第三部分 肝癌标本平均端粒长度用于肝癌发病风险的评估

一、材料

二、方法

三、结果

小 结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢

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摘要

肝细胞肝癌（HepatocellularCarcinoma,HCC）简称肝癌，世界卫生组织数据库显示，全球每年新增约60万肝癌患者，为第三号癌症杀手。我国肝癌年发病人数约35万，有30万人死于此病，发病率和死亡率均占癌症第二位。
　　目前，以肝切除术为代表的外科治疗仍是肝癌首选治疗方法。近年来逐渐开展新的治疗方法为肝癌的治疗带来了多种选择，并大大改善了病人的预后。基因组学和蛋白质组学等高通量技术平台的迅猛进展，外源基因转导和表达技术的提高，细胞靶向与表位靶向载体的构建，生物信息数据库的日趋完备，肝癌的分子靶向治疗成为一种具有广泛临床应用前景的综合疗法。
　　虽然近年来的研究已经取得了一定的进展，但是依然存在着一些不尽人意的现象，如研究的重现性较差，研究周期长，进程较慢等。标本库的建立能有效地避免离体肿瘤组织因缺血在短期内失去其相应的生物学活性，如基因的降解、蛋白的变性等，利用同一标本库的标本进行相关研究能有效地提高研究结果的重现性。
　　肿瘤研究的最终目的是治疗人类的肿瘤，因此对肿瘤的研究模型也必须从体外实验和动物模型的研究逐渐转向人体肿瘤组织标本的研究以及临床研究。二十世纪末期以来，国际上先后建立了单病种和多病种的肿瘤组织库，并逐渐规范化，形成了标准化的操作体系。如欧洲不少国家的医疗机构拥有了自己的标准化的冰冻肿瘤组织标本库。近年国内某些研究机构也建立了肿瘤库，但多数肿瘤标本库都缺乏标准化、规范化的操作体系，所收集的肿瘤标本不能够为临床和基础研究所应用，或者在应用中受到很大的限制，因此标准化肿瘤标本库的建立具有重大的现实意义。
　　端粒是真核细胞染色体末端的一个特化结构，由一定长度高度保守的串联重复DNA序列构成，是稳定染色体的关键结构。端粒长度的变短与肿瘤发病密切相关，如：端粒缩短导致乳腺癌、前列腺癌、肺癌和膀胱癌等肿瘤的发生率显著增加。利用临床组织样本进行的研究表明：与临近的非肝癌组织和肝硬化组织相比，肝癌组织的平均端粒长度显著缩短，在肝癌发病中扮演了极其重要的角色。
　　因此，在我国西部建立一个标准化的肝癌标本库，对于肝癌的研究和临床治疗势在必行，本研究拟建立一个标准化的、规模化的肝癌标本库，并初步利用此样本库来进行肝癌标本平均端粒长度与肝癌发病风险关系的评估。
　　本研究分四个部分：
　　第一部分：肝癌生物标本的规范化收集
　　目的：探讨建立肝癌生物标本库的标准化程序，研究并制定规范化的肝癌生物标本采集、处理、保存操作流程，建立功能完善，信息丰富的肝癌生物标本库。
　　方法：借鉴国内外标本库建立的标准化程序，制定规范化的肝癌生物标本收集操作流程体系，收集来自3家临床医院的肝癌、慢性肝疾病（Chronicliverdisease，CLD）和对照患者的组织标本和血液标本，采用收集—反馈—修改的模式对标本收集的操作流程不断完善，并健全各种管理和质量控制措施，完成各种表格登记。
　　结果：通过制定标准化的标本收集流程，收集到了来自3家医院的604例肝癌组织和血液标本。并随机抽取20份DNA进行检测，证明所收集的标本具有较高的质量。
　　结论：规范化操作流程的建立有利于提高标本收集的效率，提高标本库的质量，具有很好的可操作性。
　　第二部分：肝癌标本临床资料的信息化管理
　　目的：建立肝癌标本临床资料的信息化管理系统，对所收集的肝癌标本以及相关的临床资料信息进行系统化管理。
　　方法：利用标准化的资料表格，通过系统的临床信息采集，不断完善所收集的肝癌生物标本的相关临床信息。建立基于EpiData软件的数据库管理系统，通过简单便捷的数据录入、查询、分析界面，对肝癌标本进行系统化的管理。
　　结果：通过604份肝癌标本信息的录入和初步分析，检验了对收集肝癌标本的管理系统。
　　结论：通过建立标准化的肝癌标本临床信息管理系统，能够有效提高标本管理的准确性和可操作性。
　　第三部分：肝癌标本平均端粒长度用于肝癌发病风险的评估
　　目的：对肝癌标本的平均端粒长度进行检测，探讨其与肝癌发病风险之间的联系。
　　方法：采用实时定量PCR的方法，检测肝癌标本及正常对照标本的全部染色体平均端粒长度，通过评估肝癌的发病风险和全部染色体端粒长度的相关性，进而确定二者的关系。
　　结果：通过对33例标本的检测，发现肝癌标本的平均端粒长度较正常对照组显著缩短。
　　结论：肝癌的发病风险与标本中平均端粒长度有关。

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