胃癌MG7-Ag模拟表位为基础构建多表位联合的基因疫苗的研究

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胃癌是严重威胁中国人民健康的恶性肿瘤,目前胃癌的治疗手段主要有手术切除和化疗,但均不能有效解决肿瘤转移、复发等问题.免疫治疗是肿瘤治疗的新方法,包括用外源性抗体治疗、用细胞因子调节免疫以及主动免疫治疗,用疫苗对患者的免疫系统产生特异性刺激.目的以HSP70为载体,GGGS为间隔序列,构建含有4个串联的MG7-Ag模拟表位与HSP70的融合基因疫苗,并观察该疫苗能否诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫、细胞免疫及其体内抗瘤效应.检测胃癌组织中趋化因子受体CXCR3的表达水平.方法1.将4个不同的胃癌MG7-Ag模拟表位依次设计于下游引物中,通过多次PCR将表位串联于一段无关的载体基因,将目的基因插入PMD-18T载体,酶切鉴定,测序后,利用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ将基因亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1B载体,HindⅢ酶切除无关载体基因,用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ将热休克蛋白基因插入表位之后作为佐剂,得到多表位串联的DNA疫苗.采用脂质体转染的方法将重组质粒瞬时转染至小鼠骨髓瘤SP2/0细胞.Western blotting鉴定重组蛋白4MG7-HSP70的表达2.pcDNA3.1B/4MG7-HSP70基因疫苗采用肌肉注射和静脉注射两种方式免疫接种BALB/c小鼠,每隔2周加强免疫一次,共免疫3次.以生理盐水、空载体质粒、pcDNA3.1(+)/HSP70质粒和pcDNA3.1(+)/1MG-HSP70质粒为对照.分别于初次免疫后2、4、6周收集血清,进行ELISA.第6周时取小鼠脾细胞,用MTT法进行体外杀伤实验,检测脾细胞对靶细胞的杀伤活性,用酶联免疫斑点法检测分泌IFN γ的特异性CTL.第6周时用表达有MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞对静脉接种的各组小鼠进行肿瘤攻击实验,25天后观察小鼠成瘤情况.3.应用RT-PCR,Western blotting以及流式细胞议的方法对胃癌的组织标本、多种胃癌细胞系中CXCR3的表达进行检测,从mRNA和蛋白水平探讨胃癌CXCR3的表达.

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作者
陈瑜;
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作者单位

第四军医大学;

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授予单位第四军医大学;
学科内科学(消化系病)
授予学位硕士
导师姓名吴开春;
年度 2004
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类胃肿瘤;肿瘤免疫学与血清学;
关键词
胃癌; 基因疫苗; 热休克蛋白70; 多表位联合; 趋化因子;

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