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第一章 文献综述
1.1 泰国伯克霍尔德氏菌简介
1.2 细菌抗氧化机制研究
1.2.1 活性氧(ROS)
1.2.2 氧化应激调控因子
1.3细菌自由基清除机制
1.3.1 活性氧自由基
1.3.2 抗氧化酶系与小分子抗氧化剂
1.4 研究目的与意义
1.5 技术路线
第二章 材料与方法
2.1 菌株质粒和引物
2.2 试剂
2.2.1 培养基
2.2.2 分子生物学试剂
2.2.3 生化试剂
2.3 实验方法
2.3.1 质粒提取
2.3.2 克隆构建
2.3.3 DNA片段回收
2.3.4 DNA片段酶切及连接
2.3.5 热激感受态的制备及化学转化
2.3.6 构建突变体及回复株
2.3.7 细胞总RNA提取
2.3.8 凝胶阻滞迁移实验(EMSA)
2.3.9 胞内ROS检测
2.3.10 不同胁迫条件下存活率实验
2.3.11 蛋白的表达与纯化
2.3.12 催化动力学测定
2.3.13 亚硫酸和二硫键生成分析
2.3.14 亚磺酸与二硫键的分析
第三章 实验结果
3.1 OxyR对伯克霍尔德氏ahpC的调控作用
3.1.1 OxyR负调控ahpC的表达
3.1.2 OxyR直接调控ahpC
3.2 AhpC在氧胁迫条件下的作用
3.3 AhpD作为AhpC的电子供体
3.4 Cys57和Cys171、Cys173分别为过氧化半胱氨酸残基(CP)和再生Cys残基(CR)
3.5 AhpC点突变体酶活性测定
第四章 分析与讨论
第五章 结论
参考文献
附录
致谢
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