谷氨酸棒杆菌中分枝硫醇二硫还原酶(Mtr)的抗环境胁迫作用机制研究

声明

摘要

第一章 文献综述

1．1 细菌的抗氧防线

1．1．1 活性氧自由基(ROS)

1．1．2 抗氧化物酶系统

1．1．3 小分子量抗氧化剂(Low Molecular Mass Antioxidant，LMMA)

1．2 小分子量硫醇的抗氧机制

1．2．1 小分子量硫醇的研究现状

1．2．2 谷胱甘肽(GSH)的抗氧作用

1．2．3 分枝硫醇(MSH)的抗氧作用

1．2．4 蛋白质的硫醇化修饰

1．3 谷氨酸棒杆菌中MSH二硫还原酶(Mtr)的研究现状

1．3．1 谷氨酸棒杆菌概述

1．3．2 谷胱甘肽还原酶(GR)的抗氧作用

1．3．3 分枝硫醇二硫还原酶(Mtr)的抗氧研究

1．4 研究目的与意义

第二章 材料与方法

2．1 材料

2．1．1 菌种与质粒

2．1．2 所用培养基及试剂

2．2 实验方法

2．2．1 感受态细胞的制备

2．2．2 基因克隆

2．2．3 不同胁迫条件下的存活率检测

2．2．4 胞内ROS检测

2．2．5 胞内蛋白羰基化检测(Vinckx et al．，2011)

2．2．6 抗氧酶活性及转录水平检测

2．2．7 胞内蛋白巯基水平检测

2．2．8 胞内MSH和MSSM的定量检测

2．2．9 凝胶阻滞迁移实验(EMSA)和β-半乳糖苷酶活性测定

第三章 实验结果

3．2 Mtr增强C．glutamicum对氧化剂，烷化剂，抗生素和重金属的抗性

3．3 Mtr能降低胞内ROS水平进而减少蛋白质不可逆氧化

3．3．1 过表达Mtr能增强C．glutamicum清除ROS的能力

3．3．2 过表达Mtr能降低胞内蛋白羰基化水平

3．3．3 过表达Mtr能增加胞内蛋白质可逆的硫醇化修饰

3．4 过表达Mtr提高胞内MSH∶MSSM比例

3．5 过表达Mtr会增强胞内一些抗氧酶的活性

3．6 Mtr的表达受多种胁迫压力诱导并受到SigH的正调控

第四章 分析与讨论

第五章 结论

参考文献

附录

致谢

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