奶山羊硬脂酰辅酶A去饱和酶单克隆抗体的制备与鉴定

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摘要

第一章 文献综述

1．1 羊奶脂肪酸组成及其营养价值

1．2 硬脂酰辅酶A去饱和酶与乳脂代谢

1．2．1 硬脂酰辅酶A去饱和酶的结构

1．2．2 硬脂酰辅酶A去饱和酶在反刍动物乳腺中的功能

1．3 硬脂酰辅酶A去饱和酶基因表达调控的研究进展

1．4 常用蛋白质分离纯化方法

1．4．1 根据蛋白质溶解度不同的分离方法

1．4．2 根据蛋白质分子大小的差别的分离方法

1．4．3 根据蛋白质带电性质进行分离

1．4．4 根据配体特异性的分离方法一亲和层析法

1．5 单克隆抗体技术

1．5．1 单克隆抗体研究概况

1．5．2 单克隆抗体的制备

1．5．3 单克隆抗体的优点局限

1．6 本研究的目的及意义

第二章 SCD基因的原核表达和亲和纯化

2．1 试验材料

2．1．1 主要仪器和试剂

2．1．2 菌株和质粒

2．1．3 主要溶液的配制

2．2 试验方法

2．2．1 SCD基因的生物信息学分析

2．2．2 原核表达载体的构建

2．2．3 重组蛋白的表达及鉴定

2．2．4 融合蛋白表达的优化及纯化

2．3 结果与分析

2．3．1 山羊SCD的生物信息学分析

2．3．2 重组原核表达载体P ET32a(+)-SCD的构建

2．3．3 重组蛋白的诱导表达及鉴定

2．3．4 融合蛋白表达的优化及纯化

2．4 讨论

2．4．1 融合蛋白表达序列的选择

2．4．2 表达载体及菌株的选择

2．4．3 重组蛋白表达条件的优化

2．4．4 重组蛋白的亲和纯化

2．5 小结

第三章 SCD蛋白单克隆抗体的制备及纯化

3．1 试验材料

3．1．1 主要仪器和试剂

3．1．2 细胞和实验动物

3．1．3 主要溶液的配制

3．2 方法

3．2．1 小鼠免疫试验

3．2．3 细胞融合

3．2．4 细胞融合

3．2．5 杂交瘤细胞的筛选、培养和鉴定

3．2．6 腹水的制备及纯化

3．3 结果与分析

3．3．1 免疫小鼠的血清效价

3．3．2 细胞融合及杂交瘤细胞系的建立

3．3．3 腹水的制备及纯化

3．4 讨论

3．4．1 动物免疫

3．4．2 细胞融合

3．4．3 阳性杂交瘤细胞的筛选

3．4．4 单克隆抗体的大量制备和纯化

3．5 小结

第四章 SCD单克隆抗体生物学特性的鉴定

4．1 材料

4．1．1 试剂和仪器

4．1．2 细胞

4．1．3 主要溶液的配制

4．2 方法

4．2．1 单克隆抗体效价及类型的鉴定

4．2．2 腹水单克隆抗体的Western Blot鉴定

4．2．3 免疫荧光试验

4．2．4 利用同源建模分析单抗的抗原表位

4．3 结果与分析

4．3．1 单抗效价及类型的鉴定

4．3．2 Western blot鉴定

4．3．3 免疫荧光试验

4．3．4 利用同源建模分析单抗的抗原表位

4．4 讨论

4．4．1 关于SCD单克隆抗体的生物学特性

4．4．2 利用同源建模分析单抗的抗原表位

4．5 小结

结论

参考文献

缩略词

致谢

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