猪GPR43基因cDNA克隆、组织表达及脂肪酸对小鼠该基因表达的作用研究

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脂肪组织是机体储存能量的主要场所，在能量代谢中发挥重要的作用，但脂肪过度沉积会引起人类肥胖病及相关代谢疾病，在畜牧生产中也会导致畜产品品质下降，降低体脂沉积已逐渐成为国内外学者普通关注的问题。GPR43(G protein coupled receptor 43)是G蛋白偶联受体(GPCRs)家族中的一员，体内外大量研究表明，GPR43在肥胖、糖尿病等代谢性疾病中有着非常重要的作用。本试验首次克隆了猪GPR43基因，研究其在猪脂肪组织及前体脂肪细胞中的表达规律，探讨脂肪酸对小鼠脂肪组织和脂肪细胞GPR43基因转录表达的作用。主要研究结果如下： 1.PCR克隆得到的猪GPR43基因eDNA序列长度为486 bp，GenBank登陆号为EU122439。用Clustal W软件进行同源性比对，发现其与人、小鼠和大鼠GPR43基因序列的同源性分别为89％、83％和84％。应用CDD软件分析发现，GPR43蛋白含有G蛋白偶联受体家族的7.跨膜受体结构域。 2.利用实时定量PCR和半定量两种方法研究GPR43基因在不同猪种、不同月龄、不同部位脂肪组织中的转录表达规律，结果显示，GPR43基因mRNA表达量在脂肪型猪种上显著高于瘦肉型猪种，随月龄增长表达量逐渐上升，且皮下脂肪表达量较内脏脂肪高，证实GPR43基因mRNA表达与猪肥胖程度、年龄、脂肪沉积部位密切相关。另外，研究GPR43基因在猪原代脂肪细胞中的转录表达规律，结果显示，在猪前体脂肪细胞诱导分化过程中，随着分化的进行，GPR43 mRNA表达量逐渐升高，第6天达到最高峰，说明GPR43基因mRNA表达与脂肪细胞分化程度密切相关。 3.为了研究GPR43在脂解方面发挥的作用，利用半定量RT-PCR检测GPR43与脂解有关基因(HSL和TGH)在不同月龄关中黑猪皮下脂肪组织中表达丰度，并进行相关性分析，结果显示，GPR43的mRNA的表达量与HSL、TGH呈显著负相关，揭示GPR43在调控脂肪组织的脂解过程中具有重要作用。 4.二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)是机体生长发育必需的一种多不饱和脂肪酸，在调节脂肪沉积中发挥重要作用。在本试验中，用不同浓度DHA灌胃小鼠，检测GPR43、HSL和TGH在脂肪组织中的时序表达规律。结果显示，脂肪组织中GPR43随着DHA作用时间的延长，表达量逐渐降低，而HSL和TGH表达量逐渐升高，推测DHA通过抑制GPR43的表达，促进脂肪组织的脂解。 5.研究GPR43的激动剂-乙酸盐对小鼠前体脂肪细胞分化的影响。结果表明乙酸盐具有显著促进前体脂肪细胞分化的作用，上调GPR43 mRNA的表达，同时上调分化标志基因PPARγ和C/EBPα mRNA的表达。用p38MAPK信号通路抑制剂SB203580处理脂肪细胞，能显著地抑制前体脂肪细胞的分化，并降低GPR43和PPARγ mRNA的表达，揭示了乙酸盐能促进前体脂肪细胞的分化，而p38MAPK通路的抑制，脂肪细胞分化同时被抑制，乙酸盐通过GPR43与p38MAPK信号通路密切相关。

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作者
侯增淼;
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作者单位

西北农林科技大学;

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授予单位西北农林科技大学;
学科动物学
授予学位硕士
导师姓名孙超;
年度 2008
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类转化及克隆;基因的表达;脂肪酸;
关键词
基因表达; 克隆; 组织表达; 多不饱和脂肪酸; 小鼠; 前体脂肪细胞; 皮下脂肪组织; 脂肪细胞分化; 表达量; 作用; 表达规律; 乙酸盐; 蛋白偶联受体; 抑制; 脂肪沉积; 信号通路; 显示; 不同月龄; 二十二碳六烯酸; 基因转录表达;

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