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基于SPE的苹果汁中棒曲霉素富集检测方法及棒曲霉素与麦角固醇相关性研究

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第一章文献综述

1.1棒曲霉素及其危害

1.1.1棒曲霉素

1.1.2棒曲霉素的毒理学危害

1.1.3苹果汁中棒曲霉素的来源

1.2棒曲霉素的检测方法

1.2.1微生物方法

1.2.2纸色谱法

1.2.3薄层色谱法(TLC)

1.2.4高效液相色谱法(HPLC)

1.2.5气相色谱法(GC)

1.2.6气质联用(GC-MS)

1.2.7免疫学方法

1.2.8基于SPE-HPLC的检测方法

1.3苹果汁中棒曲霉素的检测技术方法分析

1.4苹果汁中棒曲霉素的富集检测技术

1.4.1棒曲霉素的富集方法分析

1.4.2基于SPE-HPLC的富集检测技术

1.5苹果汁中的麦角固醇及其与棒曲霉素的相关性

1.5.1麦角固醇

1.5.2苹果汁中麦角固醇的来源及其安全性

1.5.3苹果汁中麦角固醇与棒曲霉素的相关性

1.6本研究的目的及意义

第二章基于SPE的浓缩苹果汁中棒曲霉素富集方法的研究

2.1材料与方法

2.1.1试验材料

2.1.2主要仪器与设备

2.1.3试验方法

2.2结果与分析

2.2.1棒曲霉素的色谱图分析

2.2.2棒曲霉素的标准曲线

2.2.3 LLE和SPE处理方法的精密度试验

2.2.4 LLE和SPE处理方法的准确度试验

2.2.5 SPE与LLE处理方法的综合比较

2.3结论

2.3.1 SPE方法在提取棒曲霉素方面优于LLE法

2.3.2初步建立了C18SPE-HPLC测定浓缩苹果汁中棒曲霉素含量的方法

第三章基于C18-SPE的浓缩苹果汁中棒曲霉素(PAT)富集检测条件优化研究

3.1材料与方法

3.1.2材料与试剂

3.1.2主要仪器与设备

3.1.3试验方法

3.2结果与分析

3.2.1棒曲霉素标准曲线绘制

3.2.2基于C18-SPE处理方法的棒曲霉素富集条件优化结果

3.3结论

3.3.1获得C18-SPE-HPLC法富集检测棒曲霉素的最优样品制备与富集条件

3.3.2富集条件优化后的C18-SPE-HPLC法富集检测优于LLE-HPLC法

3.3.3建立了C18-SPE-HPLC测定浓缩苹果汁中棒曲霉素含量的方法

第四章苹果汁中麦角固醇提取条件的优化研究

4.1材料与方法

4.1.1材料与试剂

4.1.2主要仪器与设备

4.1.3试验方法

4.2结果与分析

4.2.1麦角固醇的紫外吸收波长确定

4.2.2 HPLC法流动相对麦角固醇测定的影响

4.2.3 HPLC测定麦角固醇标准曲线绘制

4.2.4麦角固醇提取过程中皂化条件优化的单因素试验结果与分析

4.2.5麦角固醇提取过程中皂化条件优化响应面(RSM)试验结果与分析

4.3结论

4.3.1麦角固醇提取的较优皂化条件

4.3.2麦角固醇提取的最佳皂化条件

第五章苹果汁中棒曲霉素与麦角固醇的相关性研究

5.1材料与方法

5.1.1材料与试剂

5.1.2主要仪器与设备

5.1.3试验方法

5.2结果与分析

5.2.1 HPLC检测棒曲霉素标准曲线绘制

5.2.2 HPLC检测麦角固醇标准曲线绘制

5.2.3 HPLC检测棒曲霉素和麦角固醇结果

5.2.4苹果浊汁中棒曲霉素与麦角固醇含量关系研究结果与分析

5.3结论

第六章总结论

参考文献

致谢

作者简介

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摘要

棒曲霉素(Patulin,PAT)是一种具有神经毒性的真菌代谢产物,具有潜在的致癌性和诱变性,人类饮食中的棒曲霉素丰要来源于被霉菌污染的苹果和苹果汁,棒曲霉素在苹果汁中稳定时间最长,亦是判断苹果汁质量安全性的一个重要指标,受到世界各国及国际组织的极大关注;麦角固醇是绝大部分存在于真菌细胞膜中的一种固醇类化合物,可以用其有效地表征真菌的生物量,已成为真菌生物量的重要标志物之一。研究苹果汁中的棒曲霉素及麦角固醇更为准确、简便、快速的检测方法及其相关性对全面准确的评价苹果汁的安全具有重要的科学意义和产业应用前景。 木文通过对SPE-HPLC、LLE-HPLC两种方法富集检测苹果汁中棒曲霉素回收率和精密度对比试验研究,优化了最佳富集检测方法和检测条件;通过苹果汁中麦角固醇提取条件的试验优化,获得了苹果汁中麦角固醇的最佳皂化提取条件;通过苹果汁中麦角固醇与棒曲霉素相关性的研究,获得了苹果汁中棒曲霉素与麦角固醇的定量数学模型,为进一步建立通过苹果汁中麦角固醇的含量同时检测与评价棒曲霉素含量及产生菌牛物累积量奠定了一定基础。丰要试验结果如下: 1.以SPE和LLE两种处理方法作为样品净化富集方法,通过HPLC法测定处理后样品中的棒曲霉素含量,结果表明:C<,18>-SPE回收率为87.56%~88.40%、HLB-SPE回收85.45%~88.12%、LLE回收率79.47%~80.10%,变异系数分别为3.28%~4.47%,4.32%~7.15%和6.28%~7.67%;用C<,18>-SPE-HPLC测定浓缩苹果汁中棒曲霉素的含量回收率可达88%,结果精密度高,重现性好,RSD≤5%。 2.通过对C<,18>-SPE-HPLC检测条件的进一步优化,结果表明:当进样量为5.0g,梯度洗脱液用量分别为6mL甲醇、8mL 10%甲醇的二氯甲烷溶液和6mL乙酸乙酯时,采用C<,18>-SPE法富集检测棒曲霉素的回收率为88.70%~91.56%,变异系数为3.06%~4.03%。 3.利用试验设计软件Design expert,通过响应面法(RSM)建立了苹果浊汁中麦角固醇提取的二次多项数学模型,经验证表明是合理可靠的,同时利用模型的响应面及其等高线对影响麦角固醇提取量的皂化条件因子及其相互作用进行探讨,获得麦角固醇提取最佳皂化条件:皂化时间65.7min、皂化温度93.93℃、醇用量79.9mL甲醇和45.1mL乙醇、KOH为10.12g。 4.对不同批次的苹果浊汁样品中棒曲霉素与麦角固醇含量关系的研究,获得了苹果汁中麦角固醇与棒曲霉素定量数学关系模型:y=-0.0384x+3.2215,相关系数为0.9432,其中:x为苹果汁中棒曲霉素的含量,μg/L,y为苹果汁中麦角固醇的含量,mg/L。

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