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【6h】

新型肝炎相关病毒(HGV和TTV)的实验研究

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英文缩写词表

前 言

第一部分 庚型肝炎病毒(HGV)的实验研究

第一节 HGV RNA转录体感染恒河猴的研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二节 HGV细胞模型的初步建立

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第三节 HGV NS5基因在昆虫细胞中的表达与鉴定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二部分输血传播性病毒(TTV)的研究

第一节高危人群中TTV的感染率

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二节 TTV的克隆及进化分析

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

总结

综述

致谢

附录

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摘要

该文研究分别对HGV和TTV进行了一些基础研究,该文分二部分:第一部分庚型肝炎病毒(HGV)的研究.该教研室曾经构建了HGV全基因组cDNA克隆pHGVqz,并在GenBank注册(注册号为AFO81782).为了进一步阐明HGV的致病性和复制部位,该研究在获得HGV全基因组cDNA克隆的基础上,体外转录获得了全长HGVRNA基因组,研究了该RNA转录体对恒河猴的致病性,并初步建立了HGV感染的细胞模型,主要工作如下:1、HGVRNA转录体感染恒河猴的研究;以HGV全长cDNA基因组克隆为模板,体外转录制备了全长HGVRNA转录体,肝内注射感染BK15和BY1两只恒河猴,取其感染后阳性血清分别感染BS1和BM1恒河猴,然后取BM1阳性血清再感染BB1恒河猴.结论:恒河猴对HGV敏感,可作为实验动物模型.HGV可在可猴中感染并轻度的肝炎样病为.HGV可以在恒河猴肝组织复制,亦可在心脏和脾脏中复制.2、HGV细胞模型的初步建立;利用Lipofectamin将HGVRNA转录体转染,HepG2细胞,RT-PCR检测培养细胞和上清中HGV正、负链RNA,在转染后24H便可在培养上清中检测到HGV负链RNA.结论:HepG2细胞不仅对HGV易感,而且可以支持HGV的复制增殖.3、HGVNS5基因在昆虫细胞中的表达与鉴定.以pHGV-Iwh6T重组质粒为模板,PCR扩增HGVNS5部分基因片段,BamHI和KpnI酶切后定向克隆至pPROEXHTa载体进行序列测定.结论:在昆虫细胞中成功地表达了具有免疫原性的HGVNS5重组蛋白,可用于HGV感染的检测,也为研究其结构与功能提供物质材料.第二部分输血传播性病毒(TTV)的研究.为探蛤TTV的分布和基因组结构,该研究检测了TTV在上海地区献血员、血透病人和肝病患者中的感染情况,并扩增克隆了TTV亚基因组.1、高危人群中TTV的感染率;设计TTV保守区域的特异性引物,PCR检测ALT正常献血员、血透病人和肝病患者中TTV的感染率.结论:上海地区ALT正常献血员、血透病人和肝病患者中均存在TTV高感染率;经输血感染是TTV传播的主要途径.2、TTV的克隆及进化分析;利用PCR方法从TTV阳性标本中扩增出不同长度且相互重叠的TTV基因组DNA片段,分别克隆pT-Adv载体,筛选获得阳性克隆并进行DNA序列测定.结论:获得次全长的TTV基因组克隆TTV021,进化分析表明为TTVG1A亚型.TTV021序列与中国CHN2、BDH1分离株的遗传距离较近.

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