跨损伤DNA合成通路基因REV3L在宫颈癌细胞化疗增敏中的作用及其机制研究

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目的REV3L是DNA聚合酶ζ(PoIζ)的催化亚基，在跨损伤DNA合成通路(TLS)中起关键作用。本课题旨在研究REV3L基因对宫颈癌细胞化疗敏感性的影响，探讨REV3L基因在宫颈癌中作为分子靶点的价值。
　　方法采用免疫组化法检测123例宫颈癌组织及17例正常宫颈组织中PoIζ蛋白的表达水平。构建REV3L基因过表达载体pcDNA-REV3L后导入REV3L低表达的宫颈癌细胞系，构建REV3L基因干扰载体shRNA-REV3L并转染REV3L高表达宫颈癌细胞系后，通过CCK-8法检测对细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期变化、平板克隆形成实验检测克隆形成率的变化，进一步通过CCK-8法检测REV3L基因对铂类药物耐受性的影响，通过流式细胞术检测药物作用后细胞凋亡情况，并通过蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl及Bax等的变化情况。通过免疫荧光法检测顺铂处理后REV3L基因对γ-H2AX焦点形成情况的影响，蛋白免疫印迹法检测γ-H2AX等蛋白的变化。
　　结果宫颈癌组织中PoIζ蛋白表达水平较正常宫颈组织高(P＜0.05)。REV3L基因沉默后宫颈癌细胞株增殖减慢，REV3L基因过表达后宫颈癌细胞株增殖加快;沉默REV3L基因通过G1/S期阻滞抑制细胞周期进展，而REV3L基因过表达后可以越过G1/S期细胞周期检查点促进细胞周期进展;REV3L基因沉默后细胞平板克隆形成率减少，而过表达后细胞克隆形成率增加。下调宫颈癌细胞系REV3L基因表达后CCK-8检测示宫颈癌细胞对顺铂的敏感性增加;流式细胞仪检测顺铂作用后早期凋亡率增加;Western blot检测促凋亡蛋白升高，而抗凋亡蛋白降低;免疫荧光检测细胞内γ-H2AX焦点形成增多，Western blot检测γ-H2AX蛋白表达升高。REV3L基因过表达后CCK-8示细胞对顺铂的抵抗性增加;流式细胞仪检测顺铂作用后早期凋亡率降低;Western blot检测促凋亡蛋白降低，而抗凋亡蛋白升高;免疫荧光检测细胞内γ-H2AX焦点形成减少，Westernblot检测γ-H2AX蛋白表达降低。
　　结论抑制REV3L基因在宫颈癌细胞中的表达，可提高细胞对顺铂的敏感性，而过表达REV3L基因增加其对顺铂的抵抗性。REV3L可能作为宫颈癌化疗增敏的分子靶点。

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作者
杨莉;
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作者单位

复旦大学;

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授予单位复旦大学;
学科肿瘤学
授予学位硕士
导师姓名程玺;
年度 2014
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类子宫肿瘤;化学（药物）疗法;
关键词
宫颈癌; 跨损伤DNA合成; DNA聚合酶; REV3L基因; 化疗增敏; 分子靶点;

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