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影响大鼠肾小球系膜细胞纤连蛋白和Ⅳ型胶原合成的分子机制

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前言

第一部分TGF-β1对大鼠肾MsCCTGF和FN、ColⅣ表达的影响

一.材料与方法

（一）实验材料

二.实验方法

二 结果

三 小结

第二部分CTGF基因转染对大鼠肾MsCFN、ColⅣ表达的影响

一 材料与方法

二.结 果

一.pcDNA3.0-CTGF的鉴定和超纯质粒的制备

二稳定表达CTGF基因的大鼠肾MsC的建立

三阳性MsC克隆FN、ColⅣ表达的改变

三 小结

第三部分Smad2基因转染对大鼠肾MsCFN、ColⅣ表达的影响

一.材料与方法

二.结 果

一 重组Smad2真核表达质粒的鉴定有超纯质粒的制备

二 稳定表达Smad2基因的大鼠肾MsC的建立

三 阳性MsC克隆FN、ColⅣ蛋白和mRNA表达的改变

三 小结

讨论

结论

参考文献

综述 结缔组织生长因子和肾纤维化

附录

致谢

论文独创性声明及使用授权声明

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摘要

人类各种肾脏疾病的进展的共同结局是肾小球硬化和肾间质纤维化，其病理基础是肾小球或肾间质内细胞外基质(ECM)的大量沉积。Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维连接蛋白(FN)不仅是构成肾小球系膜基质和毛细血管基膜的重要成分，还具有调节MsC生长和基质合成的作用。结缔组织生长因子(CTGF)是近年来发现的一种新的生长因子，对各种肾脏疾病所致的肾纤维化起着至关重要的作用。　　本课题拟采用细胞转基因技术，观察TGF-β1信号转导通路中的Smad2及其下游介质分子CTGF对体外培养的大鼠肾MsCECM组分(FN、ColⅣ)表达的影响，为进一步阐明由TGF-β介导的肾小球硬化发生的分子机制和今后开展对肾小球疾病动物模型的基因治疗提供理论和实验依据。　　第一部分TGF-β1对大鼠MsCCTGF和FN、ColⅣ表达的影响。观察TGF-β1对体外培养的大鼠MsCCTGF和FN、ColⅣ表达的影响。结论：TGF-β1对MsCCTGF和FN、ColⅣ表达上调，仅呈现一定的时间依赖性，但未显示明显的量效关系。结果表明TGF-β1对ECM合成的促进作用与CTGF上调有密切关系。　　第二部分CTGF基因转染对大鼠肾MsCColⅣ、FN表达的影响。通过对MsC转染CTGF基因，观察转染的阳性细胞克隆中FN、ColⅣ表达的改变，以探讨CTGF在肾小球硬化中所起的作用。结论：CTGF可明显上调MsCFN、ColⅣ的表达，表明其与肾小球ECM积聚中起重要作用。 第三部分Smad2基因转染对大鼠肾MsCFN、ColⅣ表达的影响。通过对MsC转染Smad2基因，观察转染的阳性细胞克隆FN和ColⅣ表达的改变，以探讨Smad信号转导通路在肾小球ECM沉积中所起的作用。结论：TGF-β/Smad信号转导途径中的Smad2可能是促进FN及ColⅣ在肾小球中积聚，导致肾小球硬化发生的重要信号转导分子。

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