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Ⅰ.棉花黄萎病抗性基因及其相关基因的克隆与功能分析;Ⅱ.棉花凝集素基因的克隆与功能分析

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目录

前言

1.植物与病原菌分子相互作用的遗传机制研究的重要意义

1.1植物与病原菌的相互作用的遗传学基础

1.2植物抗病基因的克隆

1.3植物抗病基因的种类与概况

1.4病原菌avr基因的克隆

2.植物抗病基因表达产物与病原菌的互作机理

2.1病原菌激发子与激发子受体

2.2病原菌和植物互作的基本过程

3抗病信号传导的不同途径

3.1 SA信号传导途径

3.2 JA和乙烯信号传导途径

4.植物抗病反应系统与动物免疫系统在进化上的相关性

5植物抗病利用策略

材料与方法

1试验材料

2黄萎病菌的培养与棉花黄萎病接种

3棉花基因组DNA和大肠杆菌质粒DNA的提取

4棉花总RNA提取和棉花mRNA的纯化

5.cDNA文库的构建

6.SSH差减杂交分析

7.Southern杂交分析

8 Northern杂交分析

9.拟南芥的遗传转化

10.文库的筛选与阳性克隆的分离

结果与分析

第一部分:棉花黄萎病抗性相关基因的克隆与分离

引言:棉花抗黄萎病研究的现状和意义

1.海岛棉诱导cDNA文库的构建

2.利用抑制差减杂交方法克隆黄萎病菌诱导表达EST

3.PR-10全长基因克隆与功能分析

4.IAA反应全长基因克隆与功能分析

第二部分:棉花凝集素基因的克隆与功能分析

1.棉花Lectin-like Receptor Kinase全长基因克隆与功能分析

参考文献

缩略词表

附录

致谢

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摘要

该研究以海岛棉抗病品种7124和Pima-90为材料,利用差减杂交方法和同源序列候选基因克隆的策略分离棉花抗病基因的同源片段和抗病相关基因的EST.主要的结果如下:1.利用针刺接种的方法接种棉花的茎杆和叶片,抽提棉花两个组织的mRNA进行差减杂交,获得一个包括1165个克隆子的差减文库,对所有克隆子进行反向Northern杂交.2利用差异的EST为探针获得一个编码抗病相关蛋白的基因.命名为Gbpr-10.3.分离克隆了一个IAA反应基因,该cDNA的全长为892bp,具有一个258bp的开放读码框架,编码86个氨基酸的蛋白质.4.以抗病基因保守区段设计5对引物,以海岛棉基因组DNA为模板扩增抗病基因的同源片段.该研究以拟南芥的类凝集素基因为探针筛选棉花子房cDNA文库,获得与AtLecRK基因高度同源的2个克隆子.

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