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50Hz低频弱磁场诱导EGF受体聚集效应的研究

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第一章前言

第二章材料与方法

§1材料与试剂

§2实验仪器简介

§3磁场辐照系统

§4方法

4.1 CHL细胞培养

4.2 DPH荧光探针检测膜的流动性

4.3原子力显微镜观测EGFR拓扑学结构

4.4透射电子显微镜检测EGFR分布

4.5流式细胞仪测EGFR与EGF结合

4.6共聚焦显微镜观测EGFR分布状态

第三章实验结果与讨论

§1 50Hz低频磁场对膜流动性的影响

§2原子力显微镜观察磁场对离体受体的影响

2.1磁场暴露对EGF受体高度的影响

2.2磁场暴露对EGF受体半高宽的影响

2.3磁场暴露后EGFR聚集程度统计

§3透射电子显微镜观察磁场对离体EGFR的影响

§4磁场诱导的EGFR聚集的时间依赖性考察

§5 Glutathione还原二硫键对磁场诱导EGFR聚集的影响

§6磁场对膜上EGF受体与EGF结合能力的影响

6.1流式细胞仪检测磁场作用前后细胞上EGF受体与EGF的结合

6.2共聚焦显微镜观察磁场对EGF受体与EGF结合的影响

§7 PD153035对磁场诱导的EGFR聚集的影响

第四章总结与展望

附录Ⅰ:圆二色谱法研究脉冲电磁场对信号分子Insulin二级结构的影响

附录Ⅱ:已发表学位论文

参考文献

后记

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摘要

本文对50Hz低频弱磁场诱导EGF受体聚集效应进行了研究。文章在配体缺或的情况下,以极低频弱磁场作用于中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞,观察到细胞膜表皮生长因子受体(EGFR)发生了同配体诱导类似的、能激活EGFR信号通路的、时间依赖性的磁场诱导的聚集(clustering)现象。利用原子力显微镜(AFM)、透射电子显微镜(TEM)以及激光共聚焦扫描荧光显微镜观察了磁场对离体受体聚集和对CHL细胞上受体聚集的影响。研究结果表明,磁场直接作用于EGFR使其聚集,提示磁场作用的关键部位是胞内酪氨酸激酶域,因此膜上受体也是低频弱磁场的可能作用位点之一。

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