基于等温扩增技术的对虾白斑综合征病毒现场快速高灵敏度检测试剂盒的评价及优化

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目录

第一章 引 言

1.1几种重要的对虾病原

1.1.1白斑综合征病毒（WSSV）

1.1.2致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌（VPAHPND）

1.1.3 传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）

1.1.4黄头病毒（yellow head virus,YHV）

1.2分子生物学方法在白斑综合征病毒检测中的应用

1.2.1等温扩增技术

1.2.2聚合酶链反应技术（Polymerase Chain Reaction，PCR）

1.3环介导等温扩增产物几种鉴定方法

1.3.1染料法

1.3.2 pH法

1.3.3探针法

1.3.4电泳法

第二章 基于LAMP技术的对虾白斑综合征病毒现场快速高灵敏度检测试剂盒的评价

2.1材料与方法

2.1.1对虾和病料及仪器

2.1.2对虾白斑综合征病毒现场快速高灵敏度检测试剂盒

2.1.3标准参考组织样品DNA提取

2.1.4标准参考组织样品感染状况确定

2.1.5 WSSV标准DNA样品的制备

2.1.6参考组织样品试剂盒的检测

2.1.7试剂盒性能参数的评价

2.2实验结果

2.2.1分析灵敏度

2.2.2分析特异性

2.2.3诊断灵敏度和诊断特异性

2.2.4重复性

2.2.5储存条件下的稳定性

2.2.6运输条件下的稳定性

2.3讨论

第三章 检测试剂盒可视化染料的筛选

3.1材料与方法

3.1.1引物设计

3.1.2 标准品的制备

3.1.3可视化WSSV-LAMP反应条件

3.1.4 HNB浓度的优化

3.1.5 Caclein/MnCl2浓度的优化

3.1.6两种染料的WSSV-LAMP体系分析灵敏度比较

3.2实验结果

3.2.1 HNB浓度的优化结果

3.2.2 Caclein/MnCl2浓度的优化

3.2.3 不同可视化染料试剂盒分析灵敏度比较

3.2.4其它

3.3讨论

第四章 探针法双重LAMP的建立

4.1材料与方法

4.1.1探针的建立

4.1.2 duplex-LAMP反应体系和程序

4.1.3 duplex-LAMP分析灵敏度验证

4.1.4 duplex-LAMP分析特异性验证

4.2实验结果

4.2.1 duplex-LAMP分析灵敏度验证

4.2.2 duplex-LAMP分析特异性验证

4.2.3 探针法与染料法分析灵敏度对比

4.3讨论

参考文献

致谢