罗非鱼补体C3的克隆及无乳链球菌C5a肽酶免疫前后的组织表达分析

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近年来，罗非鱼链球菌病严重危害我国罗非鱼养殖产业，目前尚无有效防治措施。通过疫苗预防是一种可行办法。本实验室前期的研究发现，无乳链球菌C5a肽酶（ScpB）蛋白免疫罗非鱼后，能显著提高罗非鱼对无乳链球菌的抵抗力，且能增强其非特异免疫能力。补体C3是连接特异性免疫和非特异免疫的桥梁，通过克隆罗非鱼补体C3基因，并了解其在ScpB免疫前后的组织表达特点，可为进一步研究ScpB蛋白抗无乳链球菌感染的作用机制奠定基础。补体C3（Complement component C3）是补体系统的中心效应分子，在鱼类抗病原感染中发挥重要作用。为研究罗非鱼补体C3在抗无乳链球菌感染中的作用，本实验克隆了罗非鱼补体C3基因，并对其氨基酸序列、理化特性及组织表达特点进行了分析。结果显示，罗非鱼补体C3基因cDNA序列（GenBank登录号：KU977109）为6994bp，ORF区全长5361bp，共编码1786个氨基酸；通过电子克隆获得罗非鱼补体C3基因组DNA32250bp，包含外显子44个和内含子43个。罗非鱼补体C3蛋白分子量为200.14kDa，等电点为7.11，为疏水性蛋白；补体C3氨基酸序列同源性分析表明，尼罗罗非鱼与伯氏朴丽鱼（Haplochromis burtoni）相似性最高（94%），并在系统进化树中聚为一支，与其他聚为一簇的鱼类的相似性则介于36%～73.2%之间。根据所得的罗非鱼补体C3基因cDNA序列，设计引物，运用实时定量PCR技术检测ScpB免疫及无乳链球菌（GBS）感染罗非鱼前后补体C3基因在各组织中的表达量。结果表明：补体C3基因在健康罗非鱼各组织中均有表达，其中在肝脏中表达量最高；ScpB蛋白免疫组和对照组罗非鱼在人工感染GBS12h后，肝脏中补体C3表达量均上调；组间比较发现，免疫组罗非鱼肝脏中补体C3表达量在感染后4h时显著高于对照组（p<0.05）；此外，感染前（0h）免疫组罗非鱼头肾和脾脏中补体C3表达量均显著低于对照组（p<0.05），但在感染后4～12h，免疫组表达量均呈升高趋势，而对照组则呈降低趋势。根据所得的罗非鱼补体C3基因cDNA序列，设计引物，合成RNA探针，利用原位杂交技术，定位补体C3基因在罗非鱼肝脏中的分布。初步实验结果显示，补体C3基因在罗非鱼的肝脏组织中具有较强的阳性表达。本结果为进一步研究补体C3参与受免罗非鱼机体抗无乳链球菌感染的作用机制奠定理论基础。

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作者
李晓恬;
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作者单位

上海海洋大学;

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授予单位上海海洋大学;
学科渔业
授予学位硕士
导师姓名卢迈新;
年度 2016
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类动物医学（兽医学）;畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂;
关键词
罗非鱼; 补体; 克隆; 无乳链球菌; C5a肽酶; 免疫; 组织;

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