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红光依赖性的phyB–SPA1相互作用促进拟南芥光形态建成的分子机制研究

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第一章 文献综述

1.1 光敏色素蛋白研究进展概述

1.2 SPAs蛋白研究进展概述

第二章 材料与方法

2.1 材料

2.2 实验方法

2.3 拟南芥材料种植

2.4 拟南芥基因组DNA的提取

2.5 拟南芥多突变体的构建

2.6 酵母双杂交

2.7 酵母三杂交

2.8 原生质体瞬时表达系统中分析蛋白共定位

2.9 烟草瞬时表达系统中分析蛋白共定位

2.10 双分子荧光互补实验

2.11 Western Blotting检测蛋白水平

2.12 蛋白质免疫共沉淀实验( Coimmunoprecipitation assays, Co-IP)

第三章 结果与讨论

3.1 引言

3.2 实验结果

3.3 总结与讨论

第四章 创新点与研究展望

参考文献

附录1 构建载体所用引物

附录2 突变体鉴定引物

附录3 载体图谱

致谢

发表论文

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摘要

拟南芥光敏色素蛋白(phyA—phyE)是感知自然界中红光/远红光的受体。光敏色素蛋白通过介导红光/远红光信号转导途径而促进光形态建成。其主要机制包括:光敏色素蛋白光下与PIFs(PHYTOCHROME INTERACTING FACTORS)相互作用进而导致 PIFs的快速降解;光下与 COP1(CONSTITUTIVE PHOTOMORPHOGENIC1)相互作用从而介导COP1的出核转运。phyB与phyA是迄今研究及阐释最为详细的光敏色素蛋白。phyB是首要的红光受体,负责促进红光下光形态建成;phyA则是主要的远红光受体。已有的研究表明 SPA1(SUPPRESSOR OF PHYTOCHROME A1)能与COP1结合并促进COP1的活性从而抑制光形态建成。本论文中我们提出phyB促进光形态建成的机制还涉及到红光激活的phyB与SPA1的直接相互作用。红光介导的光形态建成过程中,SPA1位于PHYB的遗传学下游,发挥负调控作用。酵母和拟南芥体内的蛋白互作研究进一步表明,红光激活的phyB抑制SPA1与COP1的结合。这种抑制作用被证明至少可经由phyB与SPA1的直接互作而完成。同时,我们还证明SPA1能特异性地与Pfr活性形式的phyA直接相互作用。远红光下SPA1位于PHYA的遗传学下游而抑制光形态建成。本研究通过一系列遗传及生化分析,提出 phyB介导红光下光形态建成的一新机制:红光激活的phyB通过与SPA1直接相互作用而抑制COP1–SPA1复合体的形成及其活性,从而促进光形态建成。

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