转录终止因子PDE191调控拟南芥rpoA基因的转录终止

声明

摘要

1 引言

1．1 光合作用与叶绿体

1．1．1 叶绿体的形态结构及作用机理

1．1．2 叶绿体的起源

1．2 叶绿体的发育

1．2．1 叶绿体基因组

1．2．2 叶绿体基因的表达调控

1．3 植物叶色突变

1．4 mTERF(线粒体转录终止因子)蛋白家族

1．4．1 mTERF蛋白家族的结构特征及分类

1．4．2 mTERF蛋白家族的功能

1．4．3 mTERF蛋白家族在动物中的研究进展

1．4．4 mTERF蛋白家族在光合器官中的研究进展

1．4．5 mTERF蛋白在拟南芥中的分子功能推测

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 植物材料

2．1．2 主要仪器

2．1．3 菌株、质粒

2．1．4 抗生素

2．1．5 培养基配方

2．1．6 其它

2．2 实验方法

2．2．1 拟南芥培养条件及转化

2．2．2 T-DNA插入突变体的鉴定

2．2．3 热击感受态E.coli制备

2．2．4 大肠杆菌的转化

2．2．5 制备农杆菌感受态细胞

2．2．6 农杆菌的转化过程

2．2．7 克隆后载体的鉴定

2．2．8 碱裂解法小量抽取质粒DNA

2．2．9 小量酶切鉴定体系

2．2．10 连接片段或载体的体系

2．2．11 载体构建

2．2．12 DNA和RNA的抽取

2．2．13 RT-PCR和Real-Time PCR

2．2．14 亚细胞定位

2．2．15 透射电镜观察

2．2．16 免疫印迹杂交(Western Blot)

2．2．17 RNA印迹杂交(Northern Blot)

2．2．18 酵母双杂

2．2．19 蛋白表达纯化

2．2．20 EMSA

3 结果与讨论

3．1 PDE191基因突变导致拟南芥白化表型

3．2 PDE191编码三个转录本

3．3 PDE191基因编码一个mTERF蛋白定位至叶绿体中

3．4 pde191-1突变体中rpoA多顺反子的转录终止受到影响

3．5 pde191-1突变体中PEP调控的质体基因表达下调

3．6 PDE191结合在rpoA基因的3’末端序列

3．7 讨论

3．7．1 PDE191基因在拟南芥叶绿体发育中起重要作用

3．7．2 PDE191蛋白调控rpoA基因的正常转录终止

参考文献

致谢