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薏苡仁中常见真菌毒素的检测方法及不同储藏条件下真菌毒素含量变化的研究

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目录

摘要

英汉缩略词对照表

前言

1.立题依据

2.研究内容

3.技术路线

1.薏苡仁中玉米赤霉烯酮和α-玉米赤霉烯醇的石墨化炭黑柱净化-高效液相色谱-荧光检测法研究

1.1 实验仪器、材料与试剂

1.1.1 仪器与试剂

1.2 HPLC-FLD色谱条件

1.3 供试品溶液制备方法

1.3.1 样品提取

1.3.2 净化方法的确定

1.3.3 供试品制备方法小结

1.4 方法学考察

1.4.1 检测限和定量限

1.4.2 标准曲线

1.4.3 精密度实验

1.4.4 稳定性实验

1.4.5 重复性试验

1.4.6 回收率试验

1.5 样品测定

1.6 小结

2.薏苡仁中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮及其衍生物同时检测方法的研究

2.1 实验仪器、试剂与溶液配制

2.1.1 仪器与试剂

2.1.2 溶液配制

2.2 HPLC-FLD色谱条件的确定

2.2.1 荧光最佳激发、发射波长的选择

2.2.2 洗脱条件的选择

2.2.3 色谱条件小结

2.3 液相色谱-质谱分析条件

2.4 供试品溶液制备方法

2.4.1 净化方法的选择

2.4.2 供试品溶液制备方法小结

2.5 方法学考察

2.5.1 检测限和定量限

2.5.2 标准曲线

2.5.3 精密度试验

2.5.4 稳定性试验

2.5.5 重复性试验

2.5.6 回收率实验

2.6 样品测定

2.7 HPLC-ESI-MS/MS确证结果

2.8 小结

3.不同储藏条件下薏苡仁中真菌毒素含量变化的初步研究

3.1 实验部分

3.1.1 仪器与试剂

3.1.2 溶液配制

3.1.3 实验方法

3.2 结果与讨论

3.2.1 不同储藏条件下薏苡仁中AF含量的变化

3.2.2 不同储藏条件下薏苡仁中ZON含量的变化

3.2.3 薏苡仁外观霉变情况与真菌毒素的关系

3.3 小结

结论与讨论

致谢

参考文献

综述 黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮及其衍生物的研究进展

在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果

声明

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摘要

真菌毒素是一类由真菌产生的二次有毒代谢物。粮食、饲料或基于植物源性的中药材在生长、采集、储藏以及加工过程中均可能污染各种真菌,进而产生多种真菌毒素残留。在目前发现的真菌毒素中,与人们健康相关的真菌毒素主要包括黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZON)、赭曲霉毒素(OTA)等。易通过污染玉米、小麦等粮食作物进入人和动物体内引起中毒。总结现有研究发现,药食两用中药薏苡仁被AF或ZON污染的频率较高,故针对《中国药典》对ZON毒素的检测方法和限量标准缺乏,和真菌毒素多残留分析方法的缺乏现状,选择薏苡仁为重点监控中药品种,通过筛选不同净化方法,开展了ZON、α-ZOL两种真菌毒素同时检测方法和AF、ZON及其衍生物共七种真菌毒素多残留同时检测方法的研究,为药材中多种真菌毒素的同时检测方法提供参考。同时,为降低、控制真菌毒素污染,初步探寻了不同储藏条件下薏苡仁中真菌毒素含量变化的规律。主要研究内容和结论如下:
  (1)通过比较多种固相萃取小柱的净化效果,建立了薏苡仁中ZON和α-ZOL石墨化炭黑柱净化-高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD),α-ZOL与ZON的平均回收率分别为83.2%和86.1%,RSD均低于6.68%,方法检测限分别为15μg/kg和13μg/kg。本方法将石墨化炭黑运用于薏苡仁ZON和α-ZOL的净化富集中,并结合高效液相色谱进行检测,操作简便,结果准确,与免疫亲和柱、质谱等材料或设备相比,经济实用,易于推广,为ZON及其衍生物的分析方法提供参考和新思路。
  (2)本文通过比较多种前处理小柱的净化效果,采用免疫亲和柱净化,在线柱后光化学衍生和HPLC-FLD建立了薏苡仁中AFG2、AFG1、AFB2、AFB1、ZON、α-ZOL和β-ZOL共7种真菌毒素的同时检测方法。7种真菌毒素的平均回收率为85.8%~97.0%,RSD均低于11.93%。该方法采用AF和ZON二合一免疫亲和柱净化,在线光化学衍生,与中国药典方法相比,操作简便且灵敏度高,并可同时检测AF和ZON等7种真菌毒素。进一步对不同产地的多批次薏苡仁进行了检测,结果表明薏苡仁易同时污染AFB1与ZON,检测的样品中ZON的污染范围在44.71~931.07μg/kg,处于较高水平。此污染现象应予以重视。
  (3)通过模拟高温高湿、低温密封和药材常规保存的通风干燥3种条件,分析薏苡仁在90天内不同储藏条件下常见真菌毒素的产生情况。检出结果表明储藏条件对真菌毒素的含量变化有重要影响。外观未发霉的薏苡仁也有可能含有大量真菌毒素。通风干燥的储藏条件下薏苡仁中AF和ZON产生较多,这一实验结果还需增加样品批次进行确证,其真菌毒素产生、积累的机理,和不同环境因素对薏苡仁中真菌毒素含量变化的影响有待于做进一步研究。

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