肿瘤抗原肽筛选与验证的方法新探

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该研究共分四部分,主要内容和结果如下:一、特异性T细胞对抗原肽—MHC I类分子—gfp复合物摄取的研究;在此研究中运用MHC I类分子-gfp融合蛋白标记抗原递呈细胞,通过观测gfp蛋白在细胞之间的转移,来初步验证肿瘤免疫中也存在TCR介导的抗原肽-MHC I类分子复合物的内吞.二、K<'b>-his<,6>融合基因的构建及其在真核细胞中的表达;上一部分的实验初步研究了k<'b>-gfp融合蛋白与TCR的相互作用,但在进一步的分离和功能实验中却遇到了障碍.一方面,作为标记与目的蛋白融合可以方便的标示目的蛋白的表达情况,但gfp本身是个相当大的蛋白,会降低目的蛋白的表达;另一方面,进一步分离时需使用抗gfp的单克隆抗体进行免疫共沉淀,既不经济又不方便.His<,6>是近来使用较多的一类标记分子,六个组氨酸可以通过氢键与金属离子(如镍离子)螯合成环状结构,如果把镍离子固定在凝胶柱上,蛋白样品过柱时,带有his<,6>标记的蛋白就会被吸附在柱上,从而能很方便地被分离出来.运用his<,6>标记蛋白可以提供很多便利.三、特异性T细胞对抗原肽—MHC I类分子—his<,6>复合物摄取的分析;黑色素瘤是一种恶性程度相当高的恶性肿瘤,也是在肿瘤免疫中研究最多的肿瘤之一,其肿瘤抗原的免疫原性较强,也便于对其进行深入的功能研究,因此该研究选择鼠黑色素瘤细胞B16作为肿瘤抗原肽研究的主要模型细胞.四、牛痘病毒介导肿瘤抗原肽微小基因体内表达对抗原肽特异性的验证分析;研究中我们选取了P815的肿瘤相关抗原肽:KYQAVTTTL,上推出其基因序列,将此序列整合入痘苗病毒的基因组得到重组的痘苗病毒—ES-P815.以此重组的痘苗病毒为携带编码肿瘤相关抗原肽的微小基因疫苗,免疫Balb/c鼠.同时以重组空白牛痘病毒--VAC-P815和携带P815非相关抗原肽(卵清蛋白的一段抗原肽)微小基因的重组痘苗病毒-OVA作为对照,研究CTL激活的程度和特异性.

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作者
李煜;
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作者单位

上海交通大学医学院;

上海交通大学;

上海第二医科大学;

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授予单位上海交通大学医学院;上海交通大学;上海第二医科大学;
学科生物化学与分子生物学
授予学位博士
导师姓名钱关祥;
年度 2002
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类分子生物学;肿瘤病理学、病因学;
关键词
肿瘤抗原; 肽筛选;

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