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【6h】

CpG基序重组质粒增强小鼠免疫和抗病力的效应

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前言

1材料及方法

1.1材料

1.2实验方法

1.2.1 CpG1重组真核质粒的构建

1.2.2壳聚糖纳米颗粒的制备

1.2.3免疫用质粒DNA的大量制备

1.2.4实验动物分组、免疫和攻毒

1.2.5体液免疫反应的检测

1.2.6白细胞介素-2、4、6的检测

1.2.7免疫小鼠外周血免疫细胞数量的动态变化

1.2.8数据分析

2结果

2.1重组质粒的鉴定

2.2小鼠血清IGG、IGM、IGA含量测定

2.2.1实验小鼠血清IgG、IgM、IgA含量测定(图3.4)

2.3血清细胞因子含量测定

2.3.1非特异性免疫组细胞因子含量测定(图3.5)

2.4免疫小鼠外周血免疫细胞数量的动态变化

2.4.1非特异免疫小鼠外周血免疫细胞数量的动态变化(图3.6)

3讨论

4结论

参考文献

综述 CpG-ODN研究进展

1、概述

2、研究背景

3、分类

3.1.根据对人外周血单核细胞免疫效应不同分类

3.2.根据免疫作用不同分类

4、CpG特征结构和免疫刺激机理

4.1.CpG特征结构

4.2.CpG-ODN的免疫刺激机理

5、CpG-ONA的免疫剌激功能

5.1激活B细胞

5.2诱导NK细胞活性

5.3刺激T细胞活性

5.4作用于巨噬细胞

6、CpGODN的佐剂效应和治疗作用

7、CpG与其他佐剂的比较

7.1与氢氧化铝的比较

7.2与弗氏完全佐剂(CFA)的比较

8、影响CpG-DNA发挥作用的因素

8.1寡核苷酸中CpG结构的序列、数量和两个CpG之间的碱基数

8.2不同的CpG基序可能针对不同的免疫细胞发挥作用

8.3甲基化对CpG-DNA作用的影响

8.4不同抗原对CpG-DNA作用的影响

8.5 CpG-DNA的用量、使用方法以及途径对免疫刺激效果的影响

9、CpG DNA的应用前景

9.1疫苗佐剂的应用

9.2对某些疾病的防治

9.3其它

10、CpG ODNs临床应用前景

10.1 CpG ODNs的抗感染效应

10.2 CpG ODNs用于治疗Ⅰ型变态反应疾病

10.3诱导肿瘤排斥反应

10.4 CpG ODNs的毒副作用

11、问题与展望

参考文献

在读期间发表论文

致 谢

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摘要

为研制安全高效免疫调节剂增强动物免疫抗病能力,本实验设计合成含11个C pG基序的寡聚核苷酸,重组构建含CpG的VR1012质粒(VR1C);制备壳聚糖纳米颗粒包裹重组质粒(CNP-VR1C),肌注接种3周龄昆明小白鼠,设壳聚糖包裹空质粒和生理盐水对照组:接种后28天口服大肠杆菌攻毒观察小鼠天然免疫的变化和对强毒感染的抵抗力,Sandwich ELISA测定血清免疫球蛋白和白细胞介素含量。研究结果表明:CNP-VR1C能显著提高小鼠血清IgG、IgM和IgA含量,促进小鼠血清IL-2、IL-6及IL-4显著增多,同时淋巴细胞和单核细胞数量增加,与对照组小鼠差异显著(P<0.05);攻毒后,CNP-VR1C接种小鼠的特异抗体、免疫球蛋白、淋巴细胞和单核细胞、白细胞介素含量均较对照组显著升高,无一发病;而对照组除中性粒细胞数量攻毒后明显高于免疫小鼠外,其余免疫水平均低于实验组,攻毒后均发病,消化道等组织呈现出血和肿胀等病变。这些结果表明:CpG基序插入真核质粒构建的VR1C用壳聚糖纳米颗粒分子包装后能显著提高小鼠的天然免疫水平,增强对强毒感染的抵抗力;CNP-VRlC具有研制为分子高效安全免疫增强剂的应用潜力。

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