的细胞接种于12孔板，细胞融合后，用无血清、无生长因子的培养基冲洗'/> 布地奈德协同TGF-β诱导人支气管上皮细胞和胎肺成纤维细胞中纤维粘连蛋白表达-硕士-中文学位【掌桥科研】
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布地奈德协同TGF-β诱导人支气管上皮细胞和胎肺成纤维细胞中纤维粘连蛋白表达

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综述 糖皮质激素在气道和肺纤维化中的研究进展

以第一作者发表的论文及综述

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摘要

目的:探讨布地奈德对转化生长因子(TGF-β)诱导人胎肺成纤维细胞(HFL-1)、人支气管上皮细胞(HBEC)中细胞外基质成分纤维粘连蛋白(FN)的表达的影响。 方法:经原代培养传代获得的人支气管上皮细胞和胎肺成纤维细胞培养，在5％CO2或95％空气，37℃的孵箱中，在100mm的组织培养皿中，经酶解消化后以1×10<'5>的细胞接种于12孔板，细胞融合后，用无血清、无生长因子的培养基冲洗2-3遍，饥饿24小时。培养人胎肺成纤维细胞在实验前新鲜无血清培养液中加入及不同浓度的布地奈德同时加入TGF-β2、TGF-β3后共同孵育48小时。培养的人支气管上皮细胞在实验前，新鲜的无生长因子培养基中加入TGF-β的亚型TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、布地奈德或同时加入布地奈德与TGF-β共同孵育24小时。到规定的时间，回收上清液，储存在-80℃，计数各孔细胞，ELISA法检测上清夜中纤维粘连蛋白。 结果: ①人胎肺成纤维细胞与不同浓度的布地奈德孵育48小时，随剂量的增加，纤维粘连蛋白的表达增加，是基础分泌量的5-6倍，呈剂量依赖性。 ②TGF-β2、TGF-β3诱导人胎肺成纤维细胞释放纤维粘连蛋白，在不同浓度的布地奈德分别和TGF-β2、TGF-β3与共同孵育48小时后，随布地奈德剂量的增加TGF-β2、TGF-β3能诱导释放的纤维粘连蛋白进一步显著增加。与单用TGF-β组相比p<0.05。 ③布地奈德、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3与人支气管上皮细胞共同孵育24小时后，布地奈德和TGF-βs均能显著增加纤维粘连蛋白的释放， ④布地奈德与FGF-β联用后，纤维粘连蛋白的释放进一步增加(p<0.05)。 结论: ①布地奈德能增加人胎肺成纤维细胞纤维粘连蛋白的分泌，并呈剂量依赖性。布地奈德协同TGF-β2、TGF-β3诱导人胎肺成纤维细胞中纤维粘连蛋白的分泌并呈剂量依赖性。 ②TGF-βs、布地奈德均促进人支气管上皮细胞中纤维粘连蛋白的合成，同时布地奈德进一步促进TGF-βs诱导人支气管上皮细胞纤维粘连蛋白的合成。 ③布地奈德协同TGF-βs诱导的人胎肺成纤维细胞、人支气管上皮细胞纤维粘连蛋白的释放。揭示了糖皮质激素在肺纤维化和气道重塑中疗效受限的可能新机制。

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