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两种不同细胞生产猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)的比较研究

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声明

1.文献综述

1.1伪狂犬病的流行现状和临床表现

1.2潜伏感染

1.3伪狂犬病病毒的分子生物学特征

1.3.1伪狂犬病病毒基因组结构

1.3.2伪狂犬病病毒的毒力

1.4伪狂犬病的免疫与防治

1.4.1伪狂犬病疫苗研究进展

1.4.2伪狂犬病的防制措施

2.本研究的目的和意义

3.材料与方法

3.1试验材料

3.2试验方法

3.2.1种子毒种的毒价测定

3.2.2鸡胚成纤维细胞制备时鸡胚数量的选择实验

3.2.3不同细胞繁殖生产种毒的试验

3.2.4不同细胞培养类型与不同接毒量的选择试验

3.2.5生产成品的中和效价测定及安全性检验

4.结果与分析

4.1种子种毒的毒价测定

4.2鸡胚成纤维细胞制备时鸡胚数量的选择实验

4.3不同细胞繁殖生产种毒的收获时间及毒价比较

4.4不同细胞培养类型与不同接毒量的选择实验

4.5原料成本比较

4.5.1鸡胚数量选择实验成本比较

4.5.2不同细胞培养类型与不同接毒量的选择实验成本比较

4.6生产成品的中和抗体效价测定及安全性检试验

4.6.1成品的病毒含量测定

4.6.2中和抗体效价测定结果

4.6.2安全性实验结果

5.讨论

6.结论

参考文献

致谢

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摘要

猪伪狂犬病是危害养猪业的重要疾病之一,并且也是重点防制的猪病之一。由于没有有效药物对其进行防治,因此,疫苗的免疫接种是防制猪伪狂犬病的主要手段和根除该病行之有效的措施。猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)是一种安全性好、免疫原性高的新型三基因缺失疫苗。本研究通过对利用不同细胞繁殖猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)的神毒以及利用不同细胞和不同的接毒量生产制备猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)的病毒液(半成品)的比较研究,结果表明用Vero细胞生产猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)的种毒较鸡胚成纤维细胞无论是操作和工艺以及种毒毒价测定值都较优;在生产猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)的生产过程中,鸡胚数量以40个胚制备鸡胚成纤维细胞接种一个万毫升细胞培养瓶最佳,每万ml合格病毒液所耗原料成本为4676.3元,鸡胚成纤维细胞培养成致密单层的平均时间为23.5h,既能节约成本,又能与上下工序相衔接,有利于大规模生产。 用不同细胞和不同接毒量生产猪伪狂犬病活疫苗(SA215株)的病毒液,Vero细胞和鸡胚成纤维细胞相比较,用Vero-N胞制备伪狂犬病毒液,每万ml合格病毒液所耗原料成本为3740.6元,较用鸡胚成纤维细胞成本低2292.5元;接毒量在2%-3%时病毒液的收获时间和病毒含量测定的结果较适应猪伪狂犬病毒液的生产工艺,能较好体现生产工艺的连续性,适宜大批量生产;并且在制成疫苗成品后,成品的毒价高,对21日龄仔猪免疫接种后中和抗体效价高、不同接种剂量对21日龄仔猪和妊娠后期母猪安全性能均较高,无不良反应,不影响妊娠母猪的繁殖生产性能。Vero细胞在上下工序的衔接、原料成本分析、成品的效力和安全性都较优,用Vero细胞制备伪狂犬病毒液并选择2%-3%的接毒量是今后产业化生产的首选。

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