寡核苷酸探针原位杂交和原位RT-PCR检测石蜡切片中PRRSV方法的建立及其应用

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据Gen=Bank中有关PRRSV的ORF6和ORF7保守序列，应用Oligo设计软件设计一套引物，液相PCR扩增出了预期长度为298bp的片段；另外在扩增片段长度范围内，应用Oligo软件设计一条长度为37bp的寡核苷酸探针，建立了能特异的从人工感染PRRSV仔猪组织石蜡切片中检测出PRRSV核酸的原位杂交和间接原位反转录PCR方法。　　应用建立的原位杂交检测PRRSVSC-1株人工感染不同时间在仔猪体各组织器官的分布规律，结果表明：感染后3d分别在扁桃体、淋巴结中检测到PRRSV核酸RNA，感染后5d病毒RNA出现在肺脏、胸腺，感染后7d从肾、脑、肠、脾脏、肝脏中检测到病毒。肺、肾脏、脑中病毒RNA含量较少；睾丸、附睾偶尔出现阳性信号；子宫、心脏、胰腺在整个实验过程中均呈阴性反应。　　应用原位杂交检测各组织，结果表明，淋巴结阳性信号散在于整个淋巴小结。肺脏阳性信号主要分布于肺泡膈间质的巨噬细胞以及血管内皮细胞。扁桃体阳性信号分布于其中的淋巴小结的生发中心以及间质巨噬细胞。胸腺中PRRS病毒多出现在髓质部，皮质中有少许细胞呈阳性反应。在脾脏中阳性细胞为少许淋巴细胞和巨噬细胞。肝脏阳性部位主要位于肝窦以及少量的肝细胞。肾脏阳性信号位于肾小球及其周围。肠道阳性信号位于肠集合淋巴结及肠粘膜上皮细胞。　　应用间接原位RT-PCR检测扁桃体、脾脏、肺门淋巴结、胸腺，人工感染后1d即可检测出扁桃体阳性，感染后3d检测出淋巴结、胸腺、脾脏阳性。　　本研究对建立的原位杂交方法和间接原位RT-PCR方法检测扁桃体、脾脏、胸腺、淋巴结进行了比较，结果表明：间接原位RT-PCR比原位杂交早2-4d从脾脏中检测到PRRSV的RNA，另一方面，间接原位RT-PCR与原位杂交平行检测扁桃体，间接原位RT-PCR检测到阳性信号明显强于应用原位杂交的检测结果。

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作者
李雪梅;
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作者单位

四川农业大学;

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授予单位四川农业大学;
学科预防兽医学
授予学位硕士
导师姓名程安春,汪铭书;
年度 2005
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类猪;
关键词
原位杂交; 原位RT-PCR; 分布规律; 寡核苷酸; 石蜡切片; PRRSV方法; 探针;

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