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【6h】

黄牛线粒体DNA D-环序列多态性与系统发育关系研究

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Abstract

1前言

2文献综述

2.1分子系统学的发展及应用

2.2线粒体DNA

2.2.1哺乳动物线粒体DNA结构

2.2.2线粒体DNA的遗传特点

2.3 mtDNA多态性在牛种分子系统学中的应用

2.4中国黄牛的起源分化研究

2.5实验目的和意义

3材料与方法

3.1材料来源

3.1.1样品的采集

3.1.2主要仪器

3.1.3主要试剂

3.2实验方法

3.2.1全基因组DNA提取和检测

3.2.2线粒体DNA D-环全序列的扩增

3.2.3 PCR产物的回收纯化

3.2.4线粒体DNA D-loop全序列测定

4数据处理

4.1序列分析

4.2系统发育关系的建立

4.3系统发育树的准确性和统计性检验

5结果分析

5.1 mtDNA D-loop区全序列的PCR扩增、回收纯化和测序

5.2黄牛线粒体DNA D-环区序列多态性

5.2.1碱基组成

5.2.2序列的核苷酸多态性

5.3序列的中性检验和Mismatch分析

5.4黄牛线粒体DNA D-环单倍型分析

5.5中国黄牛不同地方种间群体遗传分析

5.6黄牛的系统发育关系研究

5.6.1实验材料

5.6.2重建黄牛的系统发育关系

5.6.3黄牛的系统发育关系

6分析与讨论

6.1线粒体DNA的母性遗传

6.2黄牛mtDNA D-环序列多态性

6.3黄牛品种间的遗传分化与基因流

6.4黄牛的起源和分类

6.5黄牛线粒体DNA D-环单倍型的分布特征

结论

参考文献

致谢

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摘要

该研究测定了中国饲养的8个黄牛品种50个个体的线粒体DNA控制区(D-loop)全序列,分析结果表明:中国饲养的黄牛D-loop全序列长度为910bp、911bp和912bp,检测到59个多态位点,占分析位点总数的6.48﹪,其中单一多态位点9个,简约信息位点50个;核苷酸位点突变类型有五种,即转换、颠换、插入/缺失及转换与颠换共存.确定了23种单倍型,其中单倍型H4为中国黄牛的主体单倍型,各单倍型在品种间和品种内的分布和频率均不平衡,所测定的8个黄牛品种单倍型多样度范围从0.500~0.9444,各单倍型间的平均遗传距离为0.018(0.000~0.051),说明我国黄牛D-loop单倍型类型丰富.黄牛品种间双参数距离范围较大(0.000~0.048).群体核苷酸不配对分布曲线是一条不规则的多峰波浪型曲线,所有序列经Tajima's D中性检验结果均不显著(p>0.10),表明中国黄牛在过去没有出现群体扩张.黄牛不同地方品种之间存在一定程度的基因交流,品种之间出现了显著的遗传分化.采用黄牛mtDNA D-环全序列单倍型,以及GenBank中相关序列,通过Paup4.0和Mega2.1软件构建黄牛D-环全序列的NJ树和MP树,不同系统发育树的拓扑结构相似,并进行拓扑结构检验,差异不显著(P>0.05),表明构建的系统发育树准确.D-环的MP树和NJ树上,明显分成欧洲普通牛型和印度瘤牛型2个分枝,表明中国黄牛起源上含有欧洲普通牛和印度瘤牛的血统,但受普通牛的影响更大一些;对中国黄牛是否含有斑腾牛的血统有待进一步证实.

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