声明
摘要
第一章 前言
1．1 ES细胞研究概况
1．2 iPS细胞研究概况
1．2．1 iPS细胞系的建立
1．2．2 iPS细胞诱导体系的优化
1．3 线粒体
1．3．1 线粒体概述
1．3．2 线粒体和多能性之间的关系
1．3．3 线粒体分裂蛋白Drp1
1．3．4 Parkin与帕金森氏病
1．4 研究的目的和意义
第二章 Drp1与ES细胞多能性维持以及分化之间的关系
第一节 导言
第二节 材料和方法
2．2．1 细胞来源和品系
2．2．2 主要仪器耗材和设备
2．2．3 细胞分离与培养
2．2．4 ES细胞多能性检测
2．2．5 细胞增殖时间检测
2．2．6 Drp1 knockdown by shRNA in ES
2．2．7 蛋白质印迹检测
2．2．8 线粒体形态检测
2．2．9 免疫荧光共定位检测
2．2．10 线粒体膜电位检测
2．2．11 线粒体的电镜样品制备
2．2．12 统计学分析
第三节 实验结果
2．3．1 线粒体在ES和MEF细胞中存在明显差异
2．3．2 Drp1在ES和MEF细胞中表达形式的差异
2．3．3 Drp1修饰方式的初步检测
2．3．4 ES中Drp1 kd稳定细胞系的建立
2．3．5 Drp1 knockdown与ES细胞多能性的关系
2．3．6 Drp1 knockdown对ES细胞体外分化的影响
2．3．7 Drp1 knockdown对ES细胞体内分化的影响
2．3．8 Drp1 knockdown对ES细胞线粒体的影响及机制探讨
第四节 讨论
第三章 Drp1与iPS诱导之间的关系
第一节 导言
第二节 实验材料和方法
3．2．1 细胞来源和品系
3．2．2 主要仪器耗材和设备
3．2．3 iPS诱导
3．2．4 iPS细胞多能性鉴定
3．2．5 Drp1 knockdown by shRNA in MEF
3．2．6 统计学分析
第三节 实验结果
3．3．1 线粒体形态和Drp1表达形式在iPS细胞中存在差异
3．3．2 Drp1 knockdown稳定细胞系的建立
3．3．3 Drp1 knockdown的MEF细胞可成功被诱导为iPS细胞
3．3．4 Drp1 knockdown对iPS多能性的影响
3．3．5 Drp1 knockdown对iPS线粒体的影响
第四节 讨论
第四章 Park in K0细胞iPS的建立与分析
第一节 导言
第二节 材料和方法
4．2．1 细胞来源和动物品系
4．2．2 主要仪器耗材和设备
4．2．3 Parkin-K0 TTF细胞的分离和培养
4．2．4 Parkin-K0 TTF细胞的鉴定
4．2．5 线粒体DNA拷贝数检测
4．2．6 iPS诱导
4．2．7 iPS细胞多能性检测
4．2．8 iPS细胞体外拟胚体(EB)分化能力检测
4．2．9 统计学分析
第三节 实验结果
4．3．1 Parkin-K0细胞系的鉴定
4．3．2 Parkin-K0不影响细胞的增殖
4．3．3 Parkin-K0不影响细胞内线粒体的拷贝数
4．3．4 Parkin-K0来源iPS的获得以及iPS的诱导效率
4．3．5 Parkin-K0细胞来源的iPS具有多能性因子的表达
4．3．6 Parkin-K0细胞来源的iPS自发分化能力
4．3．7 Parkin-K0细胞来源的iPS细胞RA诱导下分化能力
第四节 讨论
第五章 结论
附录
参考文献
致谢
个人简历 在学期间参与发表的学术论文
