产紫杉醇真菌的鉴定及疑似紫杉醇基因的克隆

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第一章 前言

第一节 紫杉醇简介

第二节 紫杉醇的来源

1.2.1 紫杉醇生物合成

1.2.2 天然红豆杉植物提取

1.2.3 化学合成

1.2.4 植物组织细胞培养

1.2.5 从山榛等植物中提取

1.2.6 基因工程

1.2.7 微生物发酵法

第三节 产紫杉醇内生真菌研究进展

1.3.1 植物内生真菌简介

1.3.2 利用微生物发酵生产紫杉醇的优点

1.3.3 产紫杉醇内生真菌的分离概述

1.3.4 丝状真菌遗传转化的主要方法

第四节 18S rRNA基因结构性质及其研究进展

1.4.1 rRNA基因结构特点

1.4.2 18 S rRNA基因结构特点

1.4.3 18 S rRNA基因在进化研究中的重要性

1.4.4 18 S rRNA基因在微生物系统进化研究中的应用

第五节 研究目的及意义

第二章 材料和方法

第一节 实验材料

2.1.1 菌种

2.1.2 质粒

2.1.3 培养基

2.1.4 抗生素的配制

2.1.5 试剂

2.1.6 引物

2.1.7 仪器

第二节 实验方法

2.2.1 丝状真菌的培养

2.2.2 丝状真菌发酵产物紫杉醇的提取

2.2.3 丝状真菌发酵产物紫杉醇的鉴定方法

2.2.4 丝状真菌形态学鉴定

2.2.5 分子生物学鉴定

2.2.6 DNA序列数据的处理和分子系统进化树的构建

2.2.7 TX-79突变基因的获得

2.2.8 HutI基因3'端cDNA的获得

2.2.9 HutI基因全长的获得

第三章 实验结果与分析

第一节 紫杉醇产生菌及其发酵产物的鉴定

3.1.1 薄层层析(TLC)

3.1.2 高效液相色谱(HPLC)

3.1.3 质谱分析(MS)

3.1.4 紫杉醇产生菌株的形态学鉴定

3.1.5 紫杉醇产生菌株的分子生物学方法鉴定

3.1.6 紫杉醇产生菌株的系统进化分析

第二节 TX-79突变基因的分析

3.2.1 P.sp.NK-17突变株的鉴定

3.2.2 突变基因的获得

3.2.3 HutI基因下游序列的扩增

3.2.4 HurI全基因的获得

第四章 讨论

第一节 产紫杉醇真菌的鉴定

4.1.1 产紫杉醇真菌产紫杉醇的能力鉴定

4.1.2 内生真菌发酵液中紫杉醇的检测

4.1.3 产紫杉醇内生真菌与植物的遗传关系

第二节 不产紫杉醇突变株突变基因的获得

4.2.1 旁侧序列的扩增

4.2.2 突变基因的获得

4.2.3 突变基因的功能

小结

参考文献

致谢

附录

个人简历