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第一章 引言
第一部分蛋白质印迹技术的研究
第一节分子印迹技术的发展概况
第二节蛋白质分子印迹技术进展
第三节我组对于蛋白质印迹技术的发展成果
第四节亲环素18蛋白质
第五节本课题提出的指导思想
第二部分亲免蛋白的肽脯氨酰顺反异构酶活性
第二章实验部分
第一节试剂与实验仪器
2.1.1化学试剂
2.1.2分子生物学试剂
2.1.3实验仪器
第二节缓冲液及贮存液的配制
2.2.1基因克隆
2.2.2琼脂糖凝胶电泳
2.2.3细菌培养
2.2.4融合蛋白的大量表达
2.2.5凝血因子Xa对融合蛋白的裂解
2.2.6猪肝脏中细胞提取物及内质网体提取物的提取
2.2.7蛋白质MIP的制备及吸附
2.2.8 Bradford法测量蛋白质含量
2.2.9三氯乙酸法沉淀蛋白质
2.2.10十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
2.2.11银染法
2.2.12免疫印迹(Western Blot)
2.2.13酶活性的测定
第三节实验方法
2.3.1识别分子ARPC的制备。
2.3.2聚乙烯醇大孔微球的功能基化
2.3.3基因克隆
2.3.4克隆蛋白质的诱导表达及提纯
2.3.5猪肝脏中细胞提取物及内质网体提取物的提取
2.3.6蛋白质印迹树脂的制备过程
2.3.7蛋白质印迹树脂的吸附过程
2.3.8蛋白质的检测
2.3.9克隆和天然猪亲环素18肽脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性的测定。
2.3.10克隆和天然猪亲环素18PPIase活性对不同浓度CsA抑制剂的变化。
第三章实验结果和讨论
第一节识别分子库的构建
3.1.1识别分子的设计
3.1.2第二单体的选择
3.1.3辅助识别聚合物链的表征
第二节蛋白质印迹树脂的表征
第三节克隆蛋白质的提取结果
3.3.1融合蛋白的表达及鉴定
3.3.2融合蛋白的大量提取
3.3.3融合蛋白的裂解
第四节蛋白质印迹树脂对天然猪亲环素18的富集效果
3.4.1对照组(Control)的建立
3.4.2 SDS-PAGE电泳(银染)及免疫印迹结果
3.4.3实验结果的讨论
第五节PPIase活性测定结果
第四章课题总结
参考文献
致谢
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果
