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丝裂原活化蛋白激酶在重型再生障碍性贫血CD8+T细胞中的表达

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研究现状、成果

研究目的、方法

一、重型再生障碍性贫血患者外周血CD8+T细胞中细胞外调节蛋白激酶的表达

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、重型再生障碍性贫血患者外周血CD8+T细胞中c-Jun氨基末端激酶的表达

2.1对象和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

三、重型再生障碍性贫血患者外周血CD8+T细胞中P38 MAPK的表达

3.1对象和方法

3.2结果

3.3讨论

3.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述:丝裂原活化蛋白激酶在CD8+T细胞中作用机制的研究

致谢

个人简历

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摘要

目的:
　　目前众多研究认为再生障碍性贫血（aplastic anemia，AA）是T细胞功能亢进引起的自身免疫性疾病，其发病机制中最重要的环节是CD8+细胞毒性T细胞（cytotoxic T cells，CTL）介导骨髓造血细胞凋亡。但是何种信号通路引起AA患者CD8+T细胞功能亢进，目前尚不十分清楚。本文旨在研究重型再生障碍性贫血（Severe aplastic anemia，SAA）患者外周血CD8+T细胞中丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases，MAPKs）的表达水平，探究SAA患者CD8+T细胞功能亢进是否与MAPKs信号通路活化有关，从而损伤SAA患者的骨髓造血。
　　方法:
　　本文研究对象为天津医科大学总医院血液肿瘤科自2015年11月至2016年6月收治的SAA初治患者、SAA恢复期（包括完全缓解与部分缓解）患者及正常对照者。
　　第一部分采用流式细胞术（Flow cytometry，FCM）的方法检测20例SAA初治患者、20例SAA恢复期患者和20例正常对照者外周血CD8+T细胞中磷酸化的细胞外调节蛋白激酶（Extracellular regulated protein kinases，ERK）1/2的表达水平，与CD8+T细胞的功能分子穿孔素（Perforin）、颗粒酶B（Granzyme B）以及临床病情指标作相关性分析。采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）的方法检测10例SAA初治患者、10例SAA恢复期患者和8例正常对照者外周血CD8+T细胞中ERK mRNA的表达水平。
　　第二部分采用FCM的方法检测20例SAA初治患者、20例SAA恢复期患者和20例正常对照者外周血CD8+T细胞中磷酸化的c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinases，JNK）的表达水平，与CD8+T细胞的功能分子Perforin、Granzyme B以及临床病情指标作相关性分析。采用Real-time PCR的方法检测10例SAA初治患者、10例SAA恢复期患者和8例正常对照者外周血CD8+T细胞中JNK mRNA的表达水平。
　　第三部分采用FCM的方法检测20例SAA初治患者、20例SAA恢复期患者和20例正常对照者外周血CD8+T细胞中磷酸化的P38 MAPK的表达水平，与CD8+T细胞的功能分子Perforin、Granzyme B以及临床病情指标作相关性分析。采用Real-time PCR的方法检测10例SAA初治患者、10例SAA恢复期患者和8例正常对照者外周血CD8+T细胞中P38 MAPK mRNA的表达水平。
　　结果:
　　第一部分采用 FCM的方法检测研究对象外周血 CD8+T细胞中 p-ERK1/2的表达水平，利用平均荧光强度（Mean fluorescence intensity，MFI）的百分比表示。MFI%=（PMA刺激后 p-ERK1/2的 MFI）/（PMA刺激前 p-ERK1/2的MFI）×100%。结果示SAA初治组、SAA恢复组外周血CD8+T细胞中p-ERK1/2的 MFI%分别为（333.50±92.83）%、（328.28±116.11）%，均较正常对照组（254.35±63.63）%表达升高（P值均<0.05）。SAA初治组与SAA恢复组相比无统计学意义。p-ERK1/2的表达水平与Granzyme B的表达呈正相关，与Perforin的表达无相关性，与PLT计数呈负相关，与ANC、Hb、Ret%等其他临床病情指标无相关性。采用Real-time PCR的方法检测研究对象外周血CD8+T细胞中ERK mRNA的表达水平。结果示SAA初治组、SAA恢复组、正常对照组外周血CD8+T细胞ERK mRNA的表达分别为（1.98±0.85）、（0.43±0.59）、（0.59±0.64）。SAA初治组有高于SAA恢复组、正常对照组的趋势（P值均<0.05）。
　　第二部分采用FCM的方法检测研究对象外周血CD8+T细胞中p-JNK的表达水平，用MFI%表示。MFI%=（PMA刺激后p-JNK的MFI）/（PMA刺激前p-JNK的MFI）×100%。结果示SAA初治组、SAA恢复组、正常对照组CD8+T细胞中 p-JNK的 MFI%分别为（132.15±24.64）%、（120.10±25.16）%、（120.00±24.21）%。三组两两比较均没有统计学意义。p-JNK的表达水平与Perforin、Granzyme B的表达均无相关性，与Hb呈负相关，与ANC、PLT、Ret%等其他临床病情指标均无相关性。采用Real-time PCR的方法检测研究对象外周血CD8+T细胞中JNK mRNA的表达水平。结果示SAA初治组、SAA恢复组、正常对照组外周血 CD8+T细胞 JNK mRNA的表达分别为（5.74±4.65）、（3.83±3.81）、（0.59±0.64）。SAA初治组有高于正常对照组的趋势（P值<0.05）， SAA恢复组分别与SAA初治组、正常对照组相比均没有统计学意义。
　　第三部分采用 FCM的方法检测研究对象外周血 CD8+T细胞中 p-P38 MAPK的表达水平，用MFI%表示。MFI%=（PMA刺激后p-P38 MAPK的MFI）/（PMA刺激前p-P38 MAPK的MFI）×100%。结果示SAA初治组、SAA恢复组、正常对照组CD8+T细胞中p-P38 MAPK的MFI%分别为（121.91±15.90）%、（114.98±15.02）%、（105.88±7.76）%。SAA初治组较正常对照组表达升高（P<0.05），SAA恢复组分别与 SAA初治组、正常对照组相比均没有统计学意义。此外p-P38 MAPK的表达水平与Perforin、Granzyme B的表达均呈正相关，与PLT、Ret%等临床病情指标均呈负相关，与Hb、PLT等其他临床病情指标均无相关性。采用Real-time PCR的方法检测研究对象外周血CD8+T细胞中P38 MAPK mRNA的表达水平。结果示SAA初治组、SAA恢复组、正常对照组外周血CD8+T细胞P38 MAPK mRNA的表达分别为（22.11±28.15）（、12.70±17.69）、（2.31±3.22），三组间两两比较均没有统计学意义。
　　结论:
　　1.SAA患者外周血CD8+T细胞中ERK、P38 MAPK的表达水平均较正常对照组升高，且与CD8+T细胞的功能分子Perforin、Granzyme B的表达呈正相关，提示ERK、P38 MAPK可能参与SAA患者CD8+T细胞功能亢进的信号通路，与CD8+T细胞的毒性活动有关。
　　2.SAA患者CD8+T细胞中ERK、P38 MAPK的表达水平均与一些临床病情指标呈负相关，提示ERK、P38 MAPK可能参与介导损伤SAA患者的骨髓造血，可能对疾病进展具有提示意义。
　　3.SAA患者与正常对照组 JNK的表达水平相比暂没有统计学意义，且与Perforin、Granzyme B的表达无相关性，与临床病情指标没有明显相关性，以上结果均提示SAA患者CD8+T细胞功能亢进可能与JNK信号通路无关，但也不能除外JNK参与SAA患者体内其他生物学反应。
　　4.综上所述，MAPKs亚族在SAA患者外周血CD8+T细胞中的表达并不一致，可能参与CD8+T细胞功能亢进的信号通路，但仍需进一步研究证实，如体外抑制 SAA患者 CD8+T细胞中 MAPKs的活性或敲低 MAPKs在 SAA患者CD8+T细胞中的表达，再观察SAA患者 CD8+T细胞的毒性活动有无变化，可为今后的靶向治疗提供新的理论依据。此外，我们还可以继续探究MAPKs信号通路在SAA患者体内的其他生物学作用。

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