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肺炎链球菌临床分离株耐药机制和常见血清型及毒力基因研究

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前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、临床分离肺炎链球菌的耐药性

1.1 材料和方法

1.2 结果

1.3 讨论

1.4 小结

二、临床分离肺炎链球菌耐药基因检测

2.1 材料和方法

2.2 结果

2.3 讨论

2.4 小结

三、临床分离肺炎链球菌常见血清型和毒力基因检测

3.1材料和方法

3.2 结果

3.3讨论

3.4小结

结论

参考文献

发表论文情况说明

综述: 肺炎链球菌耐药及致病机制的研究进展

致谢

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摘要

目的:调查天津医科大学总医院临床分离肺炎链球菌对常用抗菌药物的敏感性，检测其常见血清型及毒力基因的分布情况，并对其耐药机制进行初步分析，为合理使用抗生素治疗肺炎链球菌感染提供依据同时控制该耐药菌株在医院内的传播。
　　方法:收集2012年10月至2014年4月天津医科大学总医院临床分离的非重复肺炎链球菌72株，应用Vitek-2 compact全自动细菌分析系统及配套鉴定卡和相应微量肉汤稀释试验分别进行菌种鉴定和药敏试验；应用聚合酶链反应（PCR）方法检测大环内酯类抗菌药物耐药基因，包括红霉素核糖体甲基化酶基因（ermB）、主动外排基因(mefA、mefE)，四环素耐药基因(tetM)以及转座子整合酶基因(intTn)；常见血清型基因（3、6A/B、14、15A、19A、19F、23F）及毒力基因自溶素基因（lytA）、溶血素基因（ply)及神经氨酸酶基因(nanA)。PCR扩增的基因阳性产物进行测序并与GenBank数据库比对。
　　结果:72株肺炎链球菌药敏结果显示，对万古霉素、利福平均敏感，对左氧氟沙星、头孢噻肟、氯霉素、阿莫西林、青霉素敏感率大于76％，其中对青霉素耐药率PRSP为1.4%，中介率PISP为22.2%、敏感率PSSP为76.4%。对红霉素、克林霉素、四环素敏感率低于10%。72株肺炎链球菌携带红霉素耐药基因ermB65株（90.3%）、mefE17株（23.6%）、mefA9株（12.5%）、四环素耐药基因tetM63株（87.5%），转座子整合酶基因intTn62株（86.1%），其中ermB+tetM+intTn38株（52.8%）。对四环素耐药的肺炎链球菌tetM基因阳性率是93.8%，高于四环素敏感菌株（20%）；对四环素耐药的菌株，其对红霉素和克林霉素的耐药率亦高于四环素敏感的菌株；intTn基因阳性组的红霉素、克林霉素和四环素的耐药率较 intTn基因阴性组高。72株肺炎链球菌常见血清型依次为19F(15，20.8%)、3(12，16.7%)、23F(9，12.5%)、6A/B(8，11.1%)、14(6，8.3%)、19A(4，5.6%)和15A(2，2.8%)。毒力基因检测结果为lytA65株（90.3%）、ply67株（93.1%）、nanA52株（72.2%），其中51株（70.8%）同时携带 lytA、ply和 nanA三种基因，12株（16.7%）同时携带 lytA和 ply基因，1株（1.4%）同时携带 ply和 nanA基因。PCR扩增产物经测序并与GenBank数据库比对后均为目的基因。
　　结论:本研究的临床分离肺炎链球菌对万古霉素、利福平敏感率均为100%，左氧氟沙星、氯霉素、头孢噻肟敏感率较高，对红霉素、克林霉素和四环素耐药率较高。临床分离的肺炎链球菌同时携带多种耐药基因，其中最常见的耐药基因组合方式为ermB+tetM+intTn，ermB基因和tetM基因分别是引起大环内酯类抗菌药物和四环素类抗菌药物耐药的主要机制，intTn基因可能是介导肺炎链球菌多重耐药的重要机制，临床医师应注意合理用药。血清型19F、3和23F是主要常见的血清型，本地区人群接种肺炎链球菌疫苗时应首选含有这三种血清型的PCV13荚膜多糖抗原疫苗。毒力基因 lytA和 ply检出率较高，为进一步研究毒力因子的作用机制提供一定基础，并为研制抗肺炎链球菌新药和预防肺炎链球菌感染的新型疫苗提供帮助。

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