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重症手足口病患儿肠道病毒71型的检测及基因特征分析

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声明

摘要

缩略语/符号说明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、肠道病毒的鉴定与分型

1.1 对象和方法

1.1.1 研究对象

1.1.2 主要仪器和试剂

1.1.3 方法和步骤

1.1.4 统计学分析

1.2 结果

1.2.1 肠道病毒荧光RT-PCR检测结果

1.2.2 不同性别、年龄儿童肠道病毒检出率的比较

1.2.3 不同标本肠道病毒的检出情况

1.2.4 肠道病毒71型的IgM抗体检测结果

1.2.5 临床资料分析

1.3 讨论

1.3.1 重症手足口病的病原学特征

1.3.2 重症手足口病的易感人群分析

1.3.3 不同临床标本对于疾病早期诊断的价值

1.3.4 肠道病毒快速检测方法的评价

1.4 小结

二、肠道病毒71型的VP1基因特征分析

2.1 对象和方法

2.1.1 研究对象

2.1.2 主要仪器和试剂

2.1.3 方法和步骤

2.2 结果

2.2.1 肠道病毒71型VP1基因扩增

2.2.2 序列同源性比对分析

2.2.3 系统进化分析

2.3 讨论

2.4 小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

附录

综述 肠道病毒71型及其相关手足口病的研究进展

致谢

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摘要

目的:
  对2012年手足口病流行期间天津市儿童医院收治入院的重症手足口病(HFMD)患儿进行病原学分析,了解重症病例肠道病毒71型(EV71)的检出和其他病原体的流行趋势变化,探讨不同临床标本及IgM抗体检测对于EV71感染的早期诊断价值,同时通过VP1全基因扩增了解EV71流行株的的型别和基因特征,为天津市EV71病毒毒株的基因库及其分子流行病学研究补充资料,为本地区重症手足口病的监测、治疗和预后提供参考。
  方法:
  以2012年7月至9月天津市儿童医院收治入院的98例重症手足口病患儿为研究对象,收集临床标本共188份,包括咽拭子79份,粪便86份,脑脊液23份,其中67例患儿同时留取咽拭子和粪便标本。整理患儿临床资料,提取病毒核酸,采用三通道一步法实时荧光RT-PCR检测总肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16(CA16),同时采用ELISA法检测患者血清中的EV71特异性IgM抗体。然后从EV71阳性标本中选取部分病例进行EV71的VP1全基因扩增,并进行核苷酸序列比对和遗传进化分析。
  结果:
  98例重症HFMD患儿中EV71的阳性率为60.2%(59/98); CA16的阳性率为10.2%(10/98);非EV71非CA16的其他类型肠道病毒(NENC)占16.3%(16/98); EV总阳性率为82.7%(81/98),同时有4例患儿为EV71和CA16双阳性。本组重症病例中男女性患儿的比例大约为2∶1,二者的肠道病毒检出率无显著统计学差异。5岁以下的患儿占95.9%,75.5%在6个月到2岁之间,不同年龄组患儿的肠道病毒检出率差异无统计学意义。粪便标本的肠道病毒阳性率显著高于咽拭子标本,分别为82.6%和53.2%。23份脑脊液标本中均未检测到肠道病毒核酸。ELISA法检测的血清EV71IgM抗体阳性率为70.4%,高于荧光RT-PCR检测的病毒核酸阳性率(60.2%)。16株EV71VP1全基因序列的遗传进化分析表明本研究中的EV71毒株属于C4a亚型。
  结论:
  1、2012年天津市重症手足口病的病原体以EV71为主,其次是EV71和CA16以外的其他肠道病毒。
  2、重症手足口病的易感人群为5岁以下的儿童,尤其是2岁以下患儿,应警惕幼龄儿童发展为重症的可能,但是肠道病毒检出率无明显性别和年龄差异。
  3、粪便标本的病毒检出率高于咽拭子,检测结果更稳定,更适合做病原学检测以辅助疾病的早期诊断,脑脊液中不易检测到病毒。
  4、ELISA法IgM抗体检测操作简单、快速经济,能够满足基层医疗机构EV71感染的防控需求。
  5、2012年度天津市导致重症手足口病的EV71优势毒株为C4a基因亚型。

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