胸腺素β4促进肝前体细胞分化为肝细胞的体外研究

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目的：
　　探索胸腺素β4（Tβ4）对肝前体细胞（WB-F344细胞）增殖及分化的影响，研究Tβ4诱导分化细胞的功能，为Tβ4在促进肝前体细胞分化，促进肝再生方面提供理论依据。
　　方法：
　　1.用含不同浓度Tβ4的等量培养液体外培养WB-F344细胞，培养液中Tβ4浓度分别为1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1μg/ml，相应命名为1ng/ml组、10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组，以无Tβ4培养液培养的细胞为空白对照组。在加入处理因素培养细胞1天、2天及3天后，采用CCK-8方法检测各组Tβ4对F344细胞增殖的影响，同时观察Tβ4对WB-F344细胞形态的影响。
　　2.选择对WB-F344细胞增殖影响有统计学意义的组（10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组），同时设立空白对照组，采用qRT-PCR方法检测肝细胞标志物（白蛋白）、肝干细胞标志物（甲胎蛋白）及胆管细胞标志物(细胞角蛋白-19)基因的表达，采用Western blot方法检测白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)及细胞角蛋白-19(CK-19)蛋白的表达，确定Tβ4可诱导WB-F344细胞分化为何种细胞。在加入处理因素5天后，观察Tβ4诱导细胞的糖原合成功能，吲哚靛青绿摄取情况，研究Tβ4诱导细胞可发挥的功能。
　　结果：
　　1.细胞增殖实验发现:加入处理因素1天及2天后，实验组细胞增殖与对照组相比无明显差异，而在加入处理因素3天后，10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比，细胞增殖速度减缓(P＜0.05)。同时，Tβ4诱导培养细胞的细胞核由肝前体细胞的单核细胞向肝细胞样细胞的双核或多核细胞转变。
　　2.在加入处理因素后3天后，qRT-PCR结果显示:100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比，ALB基因表达量明显增加，差异具有统计学意义（P均＜0.05），Western blot结果显示:10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比，CK-19蛋白表达量下降，差异有统计学意义（P均＜0.05）。在加入处理因素5天后，Western blot结果显示:10ng/ml组、100ng/ml组、1μg/ml组较对照组相比，AFP蛋白表达量下降（P均＜0.05），在100ng/ml组、1μ/ml组较对照组相比，ALB蛋白表达量增加（P均＜0.05），呈现一定的剂量依赖性。
　　3.在细胞功能方面:在加入处理因素后5天后，糖原染色结果及ICG摄取实验结果显示Tβ4诱导细胞较对照组相比，糖原合成及ICG摄取增多，且在1μg/ml组最明显。
　　结论：
　　Tβ4可诱导WB-F344细胞向成熟肝细胞方向分化，且诱导分化的细胞具备一定的成熟肝细胞的功能，为Tβ4应用于肝再生提供一定的理论依据。

著录项

作者
张敏;
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作者单位

天津医科大学;

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授予单位天津医科大学;
学科临床医学;内科学
授予学位硕士
导师姓名韩涛;
年度 2014
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肝脏的生理;
关键词
胸腺素β4; 肝脏前体细胞; 分化细胞; 细胞形态;

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