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结核杆菌PhoPR双组分系统过表达对新疆地区耐药结核杆菌临床分离株耐药性的影响及其机制研究

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前言

材 料 和 方 法

1 材料

1. 1 菌株

1. 2 质粒和载体

1. 3 主要试剂

1. 4 主要实验仪器设备

1. 5 主要试剂配制

2 实验方法

2.1 构建及鉴定结核杆菌PhoP R双组分系统重组质粒

2.2 构建及鉴定过表达PhoP基因、过表达P hoR基因和过表达P hoP R基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株

2.3 检测过表达PhoP基因、过表达P hoR基因和过表达P hoP R基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株的耐药性

结果

1 构建及鉴定结核杆菌P ho PR双组分系统重组质粒

1.1 结核杆菌目的基因的PCR扩增

1.2 大肠杆菌的培养及抗生素筛选

1.3 目的基因连接T载体阳性克隆的PCR筛选

1.4 重组质粒的酶切鉴定

1.5 重组质粒的测序鉴定

1.6 目的基因连接质粒pMV361阳性克隆的筛选

1.7 重组穿梭质粒的酶切鉴定

2 构建及鉴定过表达P hoP基因、过表达P hoR基因和过表达P ho PR基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株

2.1 各过表达 PhoP R双组分系统的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株的构建

2.2 利用 Realtime-PCR技术鉴定各过表达单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株PhoP/PhoR mRNA表达量

3 检测过表达PhoP基因、过表达PhoR基因和过表达PhoPR基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株的耐药性

讨论

结论

参考文献

文献综述(Review)

参考文献

附录

致谢

作 者 简 介

石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表

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摘要

目的:探讨研究结核杆菌PhoPR双组分系统过表达对单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株耐药性的影响。
  方法:构建及鉴定重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR和pMV361-PhoPR,利用电穿孔技术将重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR和pMV361-PhoPR分别电转化至单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株,利用实时荧光定量PCR技术等检测及鉴定结核杆菌PhoPR双组分系统过表达的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株,利用显色法测定最小抑菌浓度,检测及探讨研究结核杆菌PhoPR双组分系统过表达的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株耐药性的变化。
  结果:构建及鉴定了重组质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR和pMV361-PhoPR,构建及鉴定了结核杆菌PhoPR双组分系统过表达的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株,利用刃天青显色法测定结核杆菌PhoPR双组分系统过表达的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株的最小抑菌浓度,结果显示过表达PhoP基因、过表达PhoR基因和过表达PhoPR基因的单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株耐药性均明显提高。
  结论:结核杆菌PhoP、PhoR和PhoPR基因过表达均可使单纯耐利福平的新疆地区结核杆菌临床分离株耐药性明显提高,为进一步研究结核杆菌PhoPR双组分系统对新疆地区结核杆菌耐药性调控作用机制奠定了基础。

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