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砷暴露与ABCA1基因启动子区DNA甲基化的关系研究

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第一章 引言

第二章 材料和方法

2.1 主要试剂与仪器:

2.1.1 主要试剂

2.1.2 主要仪器

2.2 THP-1巨噬细胞的诱导、培养和实验分组

2.3 CCK8法检测砷暴露半数抑制浓度

2.4 流式细胞术检测巨噬细胞内ROS生成

2.5 激光共聚焦显微镜检测p47phox在巨噬细胞内的定位

2.6 qRT-PCR检测巨噬细胞内ABCA1基因的表达

2.6.1 引物稀释

2.6.2 RNA的抽提

2.6.3 RNA纯度鉴定

2.6.4 RNA逆转录为cDNA

2.6.5 实时定量PCR

2.7 Western-blot法检测ABCA1蛋白的表达

2.7.3 转膜

2.7.4 封闭孵育抗体

2.7.5 化学发光,凝胶图像分析

2.8 焦磷酸测序检测ABCA1基因启动子区DNA甲基化情况:

2.9 油红O染色检测巨噬细胞内脂质富集情况

2.10 Hoechst染色检测细胞凋亡

2.11 流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率

2.12 数据处理

第三章 结果

3.1 CCK8法检测砷暴露半数抑制浓度

3.2 砷暴露增强THP-1巨噬细胞中ROS产生

3.3 砷暴露增强THP-1巨噬细胞中NADPH氧化酶装配

3.4 砷暴露促进THP-1巨噬细胞ABCA1基因启动子区DNA甲基化

3.5 砷暴露抑制THP-1巨噬细胞ABCA1基因的表达

3.6 砷暴露抑制THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白的表达

3.7 砷暴露促进THP-1巨噬细胞脂质富集抑制胆固醇流出

3.8 砷暴露促进THP-1巨噬细胞凋亡

第四章 讨论

第五章 结论

第六章 综述

2.1 砷与活性氧

2.2 砷与内皮功能紊乱

2.3 砷与NADPH氧化酶(NOX)

2.4 砷与脂质分布及炎症标志物

2.5 小结和展望

参考文献

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