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合欢皮皂苷对传染性胃肠炎、流行性腹泻二联活疫苗的佐剂作用

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摘要

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第一章 猪传染性胃肠炎与流行性腹泻研究进展

1.传染性胃肠炎

2.流行性腹泻

3.传染性胃肠炎、流行性腹泻疫苗研究进展

3.1 猪传染性胃肠炎疫苗

3.2 猪流行性腹泻疫苗

3.3 联合疫苗

4.兽用疫苗佐剂研究进展

4.1 传统佐剂

4.2 新型佐剂

第二章 AJSAF对猪传染性胃肠炎、流行性腹泻二联活疫苗的佐剂作用

1.材料和仪器

2 方法

2.1 免疫程序

2.2 间接ELISA测定血清中TGEV、PEDV特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2a和IgG2b抗体滴度

2.3 细胞免疫指标测定

2.4 统计学分析

3 结果

3.1 AJSAF对TGEDV受免小鼠血清中抗原特异性抗体效价的影响

3.2 AJSAF对受免小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响

3.3 AJSAF对TGEDV免疫小鼠迟发性超敏反应(DTH)反应的影响

3.4 AJSAF对受免小鼠NK细胞杀伤活性的影响

3.5 AJSAF对受免小鼠CTL细胞活性的影响

3.6 对TGEDV受免小鼠脾脏特异性T细胞细胞因子反应的影响

4 讨论

5.小结

6.展望

参考文献

致谢

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摘要

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的以猪呕吐、严重腹泻以及导致仔猪高死亡率为主要病征的高度接触性急性传染病。同时,猪流行性腹泻病毒也能够引起猪急性腹泻、呕吐以及仔猪高死亡率等与猪传染性胃肠炎相类似的症状。通常猪病毒性腹泻会发生混合性感染,给养猪生产带来了非常大的危害。
  多种病原混合感染、慢性病导致的免疫功能低下及免疫抑制等原因,有效疫苗的研发已经面临着越来越大的挑战,传统疫苗往往不能对畜禽提供有效的保护作用,迫切需要开发有效的新型疫苗及佐剂,因此,天然药物佐剂的研究与开发也越来越被人们重视。合欢皮皂苷(AJSAF)是从合欢皮中提取纯化得到的佐剂活性有效部位,前期已经证实对猪口蹄疫疫苗、猪瘟活疫苗、猪猪蓝耳病活疫苗、猪伪狂犬病弱毒疫苗等商品疫苗具有显著的佐剂作用,不仅能同时诱导Th1/Th2免疫应答,佐剂效应显著优于Quil A,而且溶血性低、毒性小。因此,AJSAF是一种理想的候选疫苗佐剂。
  本实验以QuilA为佐剂对照,采用传染性胃肠炎、流行性腹泻二联活疫苗(Transmissible gastroenteritis and porcine epidemic diarrhea live vaccine,TGEDV)联合不同剂量AJSAF免疫小鼠,研究AJSAF对TGEDV的免疫佐剂效应及作用特点。ELISA实验结果表明:AJSAF可极显著提高受免小鼠血清中传染性胃肠炎病毒(PEDV)N蛋白/猪流行性腹泻病毒(TGEV)特异性IgG及其亚类IgG1、IgG2a和IgG2b的抗体滴度(P<0.001)。淋巴细胞增殖实验结果表明:AJSAF可显著增强LPS和ConA诱导的TGEDV受免小鼠脾脏T、B淋巴细胞的增殖能力(P<0.05,P<0.01或P<0.001)。说明AJSAF能促进TGEDV受免小鼠体液免疫和细胞免疫应答,具有良好的佐剂作用。自然杀伤(Nature Killer,NK)细胞杀伤活性实验结果表明:AJSAF可显著增强受免小鼠脾脏NK细胞对靶细胞的杀伤活性(P<0.05或P<0.01),说明AJSAF可增强机体的非特异性杀伤能力。与疫苗对照组相比,AJSAF可显著促进小鼠对TGEDV诱导的DTH反应,诱导强烈的特异性细胞免疫应答。流式细胞术检测免疫小鼠脾脏PEDVN蛋白、TGEV特异性CD4+和CD8+T细胞胞细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10)反应,结果表明:AJSAF也能增加受免小鼠脾细胞中PEDV N蛋白、TGEV特异性Th1(IL-2+和INF-γ+)和Th2(IL-4+和IL-10+)CD4T细胞比率以及Tc1(IL-2+和INF-γ+)和Tc2(IL-4+和IL-10+)CD8T细胞比率(P<0.05or P<0.01)。
  上述研究结果表明:AJSAF可促进TGEDV受免小鼠体液免疫和细胞免疫应答,诱导平衡的Th1/Th2和Tc1/Tc2免疫应答,是一种理想的候选TGEDV疫苗佐剂。

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