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油茶蒲中活性单体对人前列腺增生上皮细胞系和前列腺癌细胞株的抑制作用研究

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良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）组织学定义是指上皮和间质过渡区以及前列腺前尿道区域细胞的过度生长和增殖，目前BPH发病的分子机制仍然不明确，治疗存在困难。前期研究表明油茶蒲提取物（OilteaCamellia Extract，OCE）具有改善前列腺疾病的功能，为了明确OCE抑制前列腺增生的关键活性成分并研究其作用机理，本文从具有高5α-还原酶抑制活性的OCE的聚酰胺组分Fr8中分离得到单体，研究活性单体对人前列腺增生上皮细胞系（BPH-1）和人前列腺癌细胞株(PC-3)的增殖抑制作用，进一步通过实时荧光定量PCR研究其作用于BPH-1细胞的机理，并运用细胞划痕实验检测其对PC-3细胞迁移能力的影响。主要研究结果如下:
　　(1)采用固相萃取(SPE)和高效制备液相色谱技术（preparative HPLC）从油茶蒲聚酰胺组分Fr8中分离制备得到单体，运用质谱、核磁共振等手段，对3个具有高BPH-1细胞增殖抑制活性的单体进行了结构鉴定。结果表明:3个单体分别为3-O-没食子酰基-4，6-[(S)-六羟基联苯二酰基]-α/β-D-吡喃葡萄糖(geminD)、3，4，6-三-O-没食子酰基-α/β-D-吡喃葡萄糖(GAG)、橡椀酸双内酯(VAD)，结合得率选择gemin D、GAG和VAD进一步研究其改善BPH的作用机理。
　　(2)采用AnnexinⅤ/PI双染色法测定了活性单体对BPH-1细胞凋亡的诱导作用。结果表明:试样浓度为50μg/mL～200μg/mL、作用时间为48 h时，geminD、GAG和VAD均能诱导BPH-1细胞凋亡，在同一浓度下各单体诱导BPH-1细胞凋亡活性的强弱依次为VAD＞gemin D＞GAG。
　　(3)采用实时荧光定量PCR检测了活性单体作用于BPH-1细胞后与BPH相关基因的变化。结果表明:gemin D、GAG和VAD均能通过明显下调BPH-1细胞中原癌基因C-MYC的表达以抑制细胞增殖，同时明显下调炎症功能通路环氧合酶/脂氧合酶(COX/LOX)中PTGS2（编码COX-2蛋白）、ALOX5（编码5-LOX蛋白）基因的表达，揭示了活性单体在BPH-1细胞中具有良好的抗炎作用(p＜0.05)。
　　(4)采用体外PC-3细胞模型研究了活性单体对PC-3细胞的作用，结果表明:油茶蒲活性单体能抑制PC-3细胞增殖和诱导细胞凋亡。当作用时间为48 h时，gemin D、GAG和VAD抑制PC-3细胞增殖的IC50分别为117.71μmol/L、140.69μmol/L和132.44μmol/L;试样浓度为50μg/mL～200μg/mL，在同一浓度下各单体诱导PC-3细胞凋亡活性的强弱依次为VAD＞ gemin D＞GAG，其中浓度为200μg/mL时，VAD诱导PC-3细胞凋亡率为35.8％。细胞划痕实验表明:geminD、GAG和VAD均能抑制PC-3细胞的横向迁移。
　　从油茶蒲中分离得到的3种单体gemin D、GAG和VAD均抑制人前列腺增生上皮细胞系(BPH-1)和人前列腺癌细胞株（PC-3）的增殖，且具有抗炎作用，这对于研究和开发预防和治疗前列腺疾病的产品有重要参考价值。

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