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基于多指标指纹图谱及抗氧化活性的巴西绿蜂胶研究

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摘要

第一章 文献综述

1.1 蜂胶的植物来源与化学组成

1.1.1 蜂胶的植物来源

1.1.2 蜂胶的化学成分

1.2 蜂胶的抗氧化活性

1.2.1 蜂胶的抗氧化活性研究综述

1.2.2 蜂胶中黄酮类化合物的抗氧化作用

1.2.3 蜂胶中酚酸类化合物的抗氧化作用

1.2.4 蜂胶中其它组分的抗氧化作用

1.3 蜂胶的质量控制研究

1.4 天然产物抗氧化成分的谱-效学研究

1.4.1 抗氧化成分的离线(off-line)筛选评价法

1.4.2 抗氧化成分的在线(on-line)筛选评价法

1.5 小结

第二章 本研究的目的意义与主要内容

2.1 研究的目的意义

2.2 研究的主要内容

2.3 研究的技术路线

第三章 巴西绿蜂胶中总黄酮、总酚酸及抗氧化活性测定

3.1 材料与方法

3.1.1 蜂胶样品

3.1.2 仪器及试剂

3.1.3 蜂胶样品处理

3.1.4 四因素三水平正交实验

3.1.5 总黄酮含量测定

3.1.6 总酚酸含量测定

3.1.7 DPPH自由基清除活性测定

3.1.8 数据分析

3.2 结果与讨论

3.2.1 四因素三水平正交试验结果与分析

3.2.2 巴西绿蜂胶中总黄酮、总酚酸含量及DPPH自由基清除活性测定

3.3 小结

第四章 巴西绿蜂胶HPLC指纹图谱研究

4.1 材料与方法

4.1.1 蜂胶样品

4.1.2 仪器及试剂

4.1.3 蜂胶样品处理

4.1.4 液相色谱分析条件

4.1.5 HPLC-ESI-MS/MS检测

4.2 实验结果与分析讨论

4.2.1 反相高效液相色谱法的建立与优化

4.2.2 HPLC指纹图谱构建

4.2.3 巴西绿蜂胶中特征性成分蜂的ESI-MS/MS鉴定

4.3 小结

第五章 巴西绿蜂胶中多酚类化学成分定量分析研究

5.1 实验材料与方法

5.1.1 蜂胶样品

5.1.2 仪器及试剂

5.1.3 蜂胶样品处理

5.1.4 液相色谱条件

5.1.5 混合标准品溶液的配置

5.1.6 方法学验证

5.2 实验结果及分析讨论

5.2.1 方法学考察结果

5.2.2 不同批次绿蜂胶样中9种多酚类化合物含量的测定

第六章 巴西绿蜂胶中抗氧化活性成分的筛选

6.1 材料与方法

6.1.1 蜂胶样品

6.1.2 仪器及试剂

6.1.3 蜂胶样品处理

6.1.4 液相色谱条件

6.1.5 离线HPLC-DPPH分析

6.2 结果与分析

6.2.1 离线HPLC-DPPH法的建立与优化

6.2.2 巴西绿蜂胶的抗氧化成分的HPLC筛选

6.3 小结

第七章 总结与展望

7.1 研究总结

7.2 创新点

7.3 研究展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文

国际学术会议交流

致谢

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摘要

蜂胶(Propolis)是西方蜜蜂(Apis mellifera)采集植物树脂分泌物并混入自身上颚腺、蜡腺等分泌物加工混合而成的胶状固形物。蜂胶的化学成分复杂,是多成分、多靶点的复杂体系,具有抑菌、抗氧化、抗炎、免疫调节以及抗肿瘤等多种生物学活性,广泛应用于医药、保健及日化等领域。
  胶源植物是影响蜂胶化学成分及生物学活性的重要因素。在巴西东南部及中西部地区,来源于酒神菊属植物(Baccharis)的巴西绿蜂胶因其独特的化学成分及强效的保健功效在世界蜂胶市场上备受追捧。大量研究表明,巴西绿蜂胶显著的抗炎、抗肿瘤、护肝、神经保护及调节血糖血脂等活性都与其抗氧化作用有关。而蜂胶的抗氧化活性是其多种化学成分相互作用的整合结果,这是蜂胶的优势,但同时也给蜂胶的质量控制造成了极大的困难。
  因此,本研究采用分光光度法、高效液相色谱/电喷雾-质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)以及离线HPLC-DPPH法,对巴西绿蜂胶的化学成分及抗氧化活性进行了测定;建立了巴西绿蜂胶的化学指纹图谱,确定了共有成分峰,同时对特征性化学成分进行定量测定;并筛选评价了巴西绿蜂胶的抗氧化活性成分,建立了抗氧化活性指纹图谱。本研究对巴西绿蜂胶的质量控制以及抗氧化活性研究具有重要意义。具体研究内容与结果如下:
  1.首先对巴西绿蜂胶的多酚类化合物及抗氧化活性进行了初步评价。采用分光光度法测定了22个不同批次巴西绿蜂胶中总黄酮、总酚酸的含量,同时对其DPPH自由基清除活性进行了测定,并考察了两者的相关性。结果表明,不同批次绿蜂胶中总黄酮含量相对较低,而总酚酸含量相对较高;DPPH自由基清除活性与总酚酸含量呈现显著的正相关,而与总黄酮含量无显著的相关性。
  2.优化建立了不同批次巴西绿蜂胶的高效液相色谱指纹图谱,确定了巴西绿蜂胶的共有化学成分。并进一步采用电喷雾-质谱法对巴西绿蜂胶的指纹图谱进行了定性分析,结合已有标准品及文献资料初步确认了其中14个多酚类化合物,其中4个黄酮类化合物,10个酚酸及其酯类化合物。
  3.建立了巴西绿蜂胶中9个特征性化学成分(绿原酸、咖啡酸、p-香豆酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4,5-三咖啡酰奎宁酸、山奈酚、山奈素及阿替匹林C)含量检测的反向高效液相色谱法。结果表明,阿替匹林C是巴西绿蜂胶中含量最为丰富的多酚类化合物,咖啡酰奎宁酸类化合物也是其主要的特征性成分;不同批次绿蜂胶化学组成基本相同,而含量上存在差异。
  4.采用离线HPLC-DPPH法研究了巴西绿蜂胶的抗氧化活性成分,同时结合多变量相关性分析筛选评价了巴西绿蜂胶的抗氧化物质基础。结果表明,咖啡酸、绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4,5-三咖啡酰奎宁酸、山奈酚、山奈素、桦木酚及阿替匹林C是巴西绿蜂胶中主要的抗氧化活性成分。

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