白桦脂酸对酿酒酵母凋亡的调控及与酵母液泡蛋白酶Pep4p的关联研究

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致谢

摘要

1 前言

1．1 白桦脂酸的研究进展

1．1．1 自桦脂酸抗肿瘤作用及机制研究

1．1．2 白桦脂酸的其他生物活性

1．2 酿酒酵母作为凋亡模式生物的研究进展

1．2．1 触发酵母的凋亡

1．2．2 酵母细胞凋亡的作用机制

1．3 酵母细胞凋亡与Pep4p的作用

1．4 课题的选题背景与研究思路

2 材料与方法

2．1 实验材料、器材与试剂

2．1．1 实验菌株

2．1．2 实验培养基

2．1．3 实验试剂

2．1．4 实验主要器材

2．2 实验方法

2．2．1 扩大培养及酵母细胞生长曲线的测定

2．2．2 酵母细胞生长及前处理

2．2．3 细胞活力实验

2．2．4 细胞存活率实验

2．3 酵母细胞凋亡检测

2．3．1 DAPI细胞核染色实验

2．3．2 Annexin V-FITC双染检测细胞凋亡实验

2．3．3 TUNEL染色

2．3．4 透射电镜观察细胞内部结构

2．4 酵母Metacaspase活性检测

2．5 白桦脂酸处理对酵母线粒体的影响

2．5．1 细胞内ROS的检测

2．5．2 细胞内线粒体膜电势检测

2．6 荧光定量PCR检测酵母细胞内caspase和线粒体部分凋亡基因表达量的变化

3．实验结果

3．1 酵母细胞的生长曲线

3．2 白桦脂酸对酵母活力及存活率的影响

3．2．1 白桦脂酸对酵母细胞活力的影响

3．2．2 白桦脂酸处理对酵母存活率的影响

3．3 白桦脂酸诱导酵母细胞死亡并出现凋亡表征

3．3．1 白桦脂酸处理酵母细胞后DAPI染色结果

3．3．2 白桦脂酸处理酵母细胞后Annexin V／PI双染结果

3．3．3 白桦脂酸处理酵母细胞后的TUNEL染色结果

3．3．4 白桦脂酸处理对酵母细胞超微结构的影响

3．4 白桦脂酸诱导细胞凋亡伴随着线粒体的扰动

3．4．1 白桦脂酸处理导致酵母细胞内ROS水平上升

3．4．2 白桦脂酸处理能够改变酵母细胞线粒体膜电位

3．5 白桦脂酸处理对酵母细胞内metacaspase的影响

3．6 白桦脂酸处理酵母细胞后线粒体相关的凋亡基因的qPCR检测结果

4 讨论

4．1 酵母细胞的生长及存活率

4．2 白桦脂酸引起酵母细胞凋亡

4．3 白桦脂酸处理酵母细胞不依赖metacaspase

4．4 白桦脂酸诱导酵母细胞凋亡通过线粒体途径完成

4．4．1 白桦脂酸处理导致酵母线粒体的扰动

4．4．2 白桦脂酸处理导致线粒体凋亡蛋白的表达改变

5 总结与展望

5．1 主要研究结论

5．2 后续研究展望

参考文献

作者简历

研究生阶段取得的主要学术成果