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【6h】

预测和预防卵巢过度刺激症以及低分子肝素在预防和治疗卵巢过度刺激症中的作用

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ACKNOWLEDGMENTS

PREFACE

ABSTRACT

摘要

LIST OF TABLES

LIST OF FIGURES

LIST OF ABBREVIATIONS AND TERMINOLOGY

TABLE OF CONTENTS

CHAPTER 1 GENERAL INTRODUCTION

1.1 OVERVIEW AND EPIDEMIOLOGY

1.2 THESIS RESEARCH OBJECTIVES

1.3 STUDY QUESTIONS

1.4 THESIS RESEARCH HYPOTHESES

1.5 THESIS OUTLINE

CHAPTER 2 LITERATURE REVIEW

2.1 The pathophysiology of ovarian hyperstimulation syndrome (OHSS)

2.2.POSSIBEL ROLE FOR LMWH IN OHSS PREVENTION AND MANAGEMENT

2.3.CONCLUSIONS

CHAPTER 3 THE ROLE OF PLASMA AND FOLLICULAR FLUID VEGF,TF AND TFPI IN PREDICTION OF OVARIAN HYPERSTIMULATION SYNDROME (OHSS)

3.1.ABSTRACT

3.2.INTRODUCTION

3.3.MATERIALS AND METHODS

3.4.RESULTS

3.5.DISCUSSION

3.6.CONCLUSIONS

CHAPTER 4 THE ROLE OF LMWH IN PREVENTION OF OVARIAN HYPERSTIMULATION SYNDROME (OHSS)

4.1.ABSTRACT

4.2.INTRODUCTION

4.3.MATERIALS AND METHODS

4.4.RESULTS

4.5.DISCUSSION

4.6.CONCLUSIONS

CHAPTER 5 THE ROLE OF LMWH IN MANAGEMENT OF OVARIAN HYPERSTIMULATION SYNDROME (OHSS)

5.1.ABSTRACT

5.2.INTRODUCTION

5.3.MATERIALS AND METHODS

5.4.RESULTS

5.5.DISCUSSION

5.6.CONCLUSIONS

CHAPTER 6 Vascular endothelial gmwth factor receptors in human ovarian follicles from infertile patients at risk for developing ovarian hyperstimulation syndrome (OHSS)

6.1.ABSTRACT

6.2.INTRODUCTION

6.3.MATERIALS AND METHODS

6.4.RESULTS

6.5.DISCUSSION

6.6.CONCLUSIONS

CHAPTERS 7 SUMMARY OF OBSERVATIONS AND CONCLUSIONS

7.1 SUMMARY OF OBSERVATIONS AND CONCLUSIONS

REFERENCES

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摘要

OHSS是在诱发排卵过程中最严重的并发症,排卵过程中伴随着组织的损伤能够引起血浆和滤泡液体(FF)中组织因子(TF)、内皮细胞生长因子(VEGF)的上调,同时会下调组织因子通路抑制剂(TFPI)的表达水平,尤其是在体外受精采用控制性排卵(OCH)过程中更易引起上述并发症。
  材料和方法:一项采用对照匹配的前瞻性研究总共纳入300名患者,分为3组,第一组为PCO或PCOS患者(随机分为两个亚组,ⅠA和ⅠB组有匹配的对照组;另设对照组ⅠC),第二组为存在发展成OHSS的高度危险因素患者(随机分为两个亚组,ⅡA和ⅡB组有匹配的对照组;另设对照组ⅡC),第三组为严重的OHSS患者(随机分为ⅢA和ⅢB两个亚组)。ⅠA组患者在COH开始时给予每天一次4100IU的速碧林注射剂,而ⅡA组患者在注射HCG的同时给予每天一次4100IU的速碧林注射剂,直到证实能否妊娠。ⅢA组患者是在被诊断为OHSS时,给予每天一次4100IU的速碧林注射剂直到完全恢复。ⅠB,ⅡB和ⅢB组患者在相同的时间点给予安慰剂。Ⅰ组和Ⅱ组患者血浆和卵泡液中的VEGF、TF、TFPI用ELISA试剂盒在4个连续的时间点被检测(促性腺激素开始时,HCG开始时,卵子取出时,胚胎移植时)。而第Ⅲ组的患者血浆中上述因子的浓度被隔天检测一次。
  在体外,60名患者的颗粒细胞(PCO/PCOS,Ⅰ组患者;存在发展为OHSS的高度危险因素的Ⅱ组患者以及它们相对应的对照组)被收集后进行原代培养(每组选20名),培养过程中,在培养基中加入1IU/ml浓度的HCG以及不同浓度的速碧林注射剂(0,5,50μg/ml)。连续共培养3天后收集颗粒细胞,提取RNA,使用VEGF165,VEGF121,TF,TFPI,和GAPDH的启动子,利用实时荧光定量PCR技术检测上述蛋白mRNA的表达水平。
  而且,通过检测血浆中VEGF、TF、TFPI的表达状况来观察速碧林治疗对OHSS患者的影响作用。同时,通过在颗粒状细胞(GC)原代培养过程中加入速碧林以及(NF-kB,JNK,Akt)三条信号通路的抑制剂,重复用实时荧光定量PCR技术检测VEGF165,VEGF121,TF,TFPI以及GAPDH的mRNA表达情况,来进一步探讨速碧林影响GC的具体机制。
  另外,利用免疫荧光技术进一步检测VEGF受体(VEGFR1、VEGFR2)在卵巢组织中的表达水平和原代培养颗粒细胞中的表达情况。卵巢组织标本取自正常对照人群以及PCO/PCOS患者。颗粒细胞取自正常人群、PCO/PCOS患者以及存在高危发展为OHSS患者(要么具有高水平的E2和取卵时有复合的成熟卵泡≥20个的患者),持续培养48小时。最后,用WesternBlot技术来检测VEGF受体(VEGFR1和VEGFR2)在上述相同分组的不育患者颗粒细胞中的表达情况。
  最后,WesternBlot用来检测VEGF受体(VEGFR1和VEGFR2)在相同三组不育患者颗粒状细胞中的表达情况。
  结果:ⅠB组和ⅡB组与其相对应的对照组在各个时间点相比,血浆和FF中VEGF、TF的表达水平明显上调,而TFPI的表达水平明显下调。除了TFPI在取卵当天以及FF中ⅠB组与ⅠC组比较外,没有明显差异。相同的分组同样也显示,VEGF165,VEGF121,和TF的mRNA水平明显高表达,TFPI的mR NA水平明显低表达,除了VEGF121和TFPI的表达水平在Ⅰ组和Ⅱ组与其对照组相比外。在同样的分组,其培养上清中,用ELISA方法检测,显示明显的VEGF、TF的高水平表达以及TFPI的低水平表达。
  在ⅠA组的各个时间点与ⅠB组相比,速碧林能明显的下调血浆及FF中VEGF、TF的表达水平,上调TFPI的表达水平。ⅠA组与ⅠB组、ⅡB组相比,OHSS的发展明显的下降。同样的上述组显示显著的VEGF165,VEGF121,以及TF的mRNA表达水平下调以及TFPI的mRNA水平下调与其对照组相比。ELISA检测发现培养液中VEGF、TF的表达量下调以及TFPI的表达上调。
  ⅢA组与ⅢB组相比,在ⅢA早期以及晚期的OHSS患者中都发现血浆VEGF、TF的量明显下调以及TFPI的量明显上调。
  在Ⅰ组和Ⅱ组颗粒细胞中发现,速碧林的作用被NF-kB、JNK和Akt通路的的抑制剂抑制。
  免疫荧光学显示:VEGF受体(VEGFR1、VEGFR2)在PCO/PCOS患者中的表达明显高于正常对照组。免疫荧光以及WesternBlot显示:VEGF受体(VEGFR1、VEGFR2)以及其蛋白水平在PCO/PCOS组、存在高危发展为OHSS患者组中的表达明显高于正常对照组。
  结论:在PCO/PCOS不育患者以及有高危发展成OHSS的患者中,VEGF、TF和TFPI具有预测价值。如果在COH开始时使用速碧林,能够阻止发展为OHSS,同样对于已经发展为OHSS的不育患者,速碧林也具有治疗作用。

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