高纯度人胰岛素的酶促半合成与分离纯化

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胰岛素是人体内主要调节血糖的激素，对于治疗糖尿病有特效。胰岛素的免疫原性与它的纯度及种属密切相关，其抗原性会导致一系列副作用，对糖尿病的控制及其并发症的发生、发展和预后均有一定的不良影响。要从根本上消除胰岛素的抗原性，就需要提供高纯度的人胰岛素。基因工程技术和酶促半合成是制备人胰岛素的两条可行途径，而后一种方法相对来说较为简便有效、经济实用。本论文进行了人胰岛素的一步法酶促半合成研究，并通过分离纯化来制备高纯度人胰岛素。　　猪胰岛素与人胰岛素的差别仅为B链30位一个氨基酸不同，猪胰岛素为丙氨酸，人胰岛素为苏氨酸。本论文以猪胰岛素和苏氨酸叔丁酯为原料，通过酶促反应使B30丙氨酸换为苏氨酸叔丁酯，合成人胰岛素酯。然后通过阴离子交换柱分离纯化人胰岛素酯。再将人胰岛素酯脱保护，除去末端的叔丁基，即可得到人胰岛素。通过以下几种方法对制备的人胰岛素进行鉴定：用PAGE、SDS-PAGE的方法对制备的人胰岛素进行蛋白电泳，均得到与标准品同一位置的单一条带；对制备的人胰岛素酯、人胰岛素分别进行C末端鉴定，得到与苏氨酸叔丁酯、苏氨酸对应层析位置的氨基酸；用HPLC法检测自制人胰岛素和标准品人胰岛素的保留时间，得到两者的保留时间一致。这些实验结果证明了所制备的蛋白即为人胰岛素，并且测得合成得率达38.4％，纯度高达97％。另外本文还采用壳聚糖通过戊二醛固定酶，制得固相酶，催化人胰岛素酯的制备，研究固相酶促半合成人胰岛素的制备。利用人胰岛素酯与猪胰岛素疏水性的差别，率先用疏水柱对人胰岛素酯进行分离纯化，取得较好的分离效果。最后用小鼠血糖法对自制人胰岛素的效价进行测定，其效价为20.6u/mg。

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作者
斯越秀;
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作者单位

浙江大学;

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授予单位浙江大学;
学科细胞生物学
授予学位硕士
导师姓名钱凯先;
年度 2005
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类胰岛素;酶及辅酶;
关键词
胰岛素; 酶促半合成; 人胰岛素; 效价; 基因工程; 糖尿病;

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