3-羟基丙醛影响克雷伯氏菌代谢及基因工程菌的构建研究

声明

摘要

主要符号对照表

1 前言

1．1 1，3-丙二醇的性质及主要应用

1．1．1 1，3-丙二醇的物理性质

1．1．2 1，3-丙二醇的化学性质

1．1．3 1，3-丙二醇的主要应用

1．2 1，3-丙二醇的生产方法

1．2．1 化学合成法

1．2．2 生物合成法

1．3 3-羟基丙醛积累影响克雷伯氏菌代谢的研究

1．3．1 中间代谢产物3-羟基丙醛积累

1．3．2 降低3-羟基丙醛积累的研究

1．4 聚羟基脂肪酸酯(PHA)的简介

1．4．1 PHA的性质及分类

1．4．2 PHA的分类

1．5 PHB的合成与生物抗逆

1．5．1 合成PHB的微生物

1．5．2 微生物合成PHA的途径

1．5．3 PHA与生物抗逆

1．6 课题研究的目的意义

1．6．1 研究目的及意义

1．6．2 论文的主要研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 菌株与质粒

2．1．2 培养基

2．1．3 主要实验设备及仪器

2．1．4 主要试剂

2．2 实验方法

2．2．1 培养方法

2．2．2 生物量的测定

2．2．3 发酵液中的底物与产物浓度测定

2．2．4 3-羟基丙醛含量的测定

2．2．5 关键酶活性的测定

2．2．6 NAD+及NADH2的测定

2．2．7 质粒的提取，酶切，切胶回收及连接方法

2．2．8 感受态细胞的制备

2．2．9 感受态细胞的转化

2．2．10 SDS-PAGE电泳

2．2．11 PHB的测定方法

3 结果与讨论

3．1 3-羟基丙醛积累对克雷伯氏菌1，3-丙二醇代谢的影响

3．1．1 克雷伯氏菌HR521发酵生产1，3-丙二醇

3．1．2 添加盐酸氨基脲对克雷伯氏菌3-羟基丙醛积累的影响

3．1．3 3-羟基丙醛对克雷伯氏菌1，3-丙二醇合成关键酶的影响

3．1．4 小节

3．2 PHB路径在克雷伯氏菌中的构建

3．2．1 重组载体pDK6-CAB的构建

3．2．2 PHB路径在大肠杆菌中的构建

3．2．3 PHB路径在克雷伯氏菌中的构建

3．2．4 小节

3．3 工程菌1，3-丙二醇发酵特性

3．3．1 工程菌PHB含量的测定

3．3．2 工程菌和野生菌发酵特性对比

3．3．3 工程菌耐3-羟基丙醛性能对比

3．3．4 小节

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读学位期间发表论文情况

致谢

附录