壳寡糖诱导番茄抗交链孢菌及菌毒素提取研究

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．1．1 诱导抗病对于果蔬采后保鲜的研究概况

1．1．2 番茄及其黑斑病致病菌的概述

1．2 植物的诱导抗病性的基本概念

1．3 植物诱导抗病性产生的主要因素及其抗菌性物质变化

1．4 诱抗剂及其诱抗剂壳寡糖的介绍

1．5 采后壳聚糖处理对果实-病原菌互作中形态结构的影响

1．5．1 对病原菌形态结构的直接影响

1．5．2 对病原菌形态结构的间接影响

1．6 植物病原菌毒素

1．6．1 植物病原菌毒素概念

1．6．2 毒素的类型

1．6．3 毒素的化学组分

1．6．4 毒素的致病机理

1．6．5 植物病原真菌毒素的提取

1．6．6 毒素的分离纯化

1．7 本论文研究的目的和意义

1．8 主要研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 供试材料

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器设备

2．2 实验方法

2．2．1 培养基的配制

2．2．2 壳寡糖溶液的配制

2．2．3 交链孢菌孢子的获得

2．3 壳寡糖对交链孢菌的影响效果

2．3．1 壳寡糖对菌落径向生长的抑制实验

2．3．2 不同浓度壳寡糖对病原菌细胞死活的影响

2．3．3 壳寡糖对交链孢菌孢子萌发的影响

2．3．4 壳寡糖对交链孢菌过氧化氢酶(CAT)的测定

2．3．5 诱抗剂处理后致病性测定

2．4 毒素的提取分离纯化

2．4．1 交链孢菌毒素的低温冻干法

2．4．2 交链孢菌毒素的萃取实验

2．4．3 萃取液的生物测定

2．5 交链孢菌毒素的纯化

2．5．1 薄层层析板准备

2．5．2 精毒素薄层层析(TLC)分析

2．5．3 柱层析纯化

2．5．4 精毒素高效液相色谱(HPLC)检测

2．5．5 精毒素红外光谱(FTIR)分析

2．5．6 粗毒素的气质联用检测

2．6 交链孢菌孢子和毒素分别对番茄的影响

2．6．1 在诱抗剂壳寡糖作用下测番茄发病率

2．6．2 菌孢子和毒素侵染后用光学显微观察

2．7 毒素对番茄防御酶活性影响的测定

2．7．1 过氧化物酶(POD)活性测定

2．7．2 多酚氧化酶(PPO)活性测定

2．7．3 苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性测定

2．7．4 超氧化歧化酶(SOD)活性测定

2．8 毒素对可溶性蛋白含量的影响

2．9 毒素对番茄细胞膜损伤的测定

2．10 壳寡糖对番茄果实防黑霉病效果

3 结果与讨论

3．1 壳寡糖对交链孢菌的作用研究

3．1．1 病原菌在不同浓度壳寡糖中的生长趋势

3．1．2 壳寡糖处理经台酚兰染色菌丝细胞死活情况

3．1．3 壳寡糖对孢子萌发的影响

3．1．4 交链孢菌在含壳寡糖液体培养基中过氧化氢酶的变化

3．1．5 交链孢菌对番茄致病力测定

3．2 交链孢菌毒素的提取与分离纯化

3．2．1 毒素的提取

3．2．2 硅胶薄层层析分离

3．2．3 硅胶柱层析收集成分

3．2．4 粗毒素高效液相色谱检测

3．2．5 交链孢菌的傅里叶红外光谱分析

3．2．6 粗毒素的气质联用

3．3 交链孢菌毒素作用于番茄

3．3．1 毒素对番茄致病性检测

3．3．2 显微镜观察细胞形态

3．4 毒素处理对番茄防御酶活性的影响

3．4．1 对POD活性的影响

3．4．2 对番茄PPO活性的影响

3．4．3 对番茄PAL活性的影响

3．4．4 对番茄SOD活性的影响

3．5 对番茄果肉可溶性蛋白含量的影响

3．5．1 标准蛋白浓度曲线

3．5．2 对番茄果肉可溶性蛋白含量的影响

3．5．3 对番茄细胞膜的损伤作用

3．6 壳寡糖对番茄果实防黑霉病效果

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢